Yüksek artı labirent takip yazılımı eksojen Ketogenic takviyeleri anksiyolitik etkisi araştırmak için Video ile kombine Test
7 Ocak 2019
Burada, kemirgen hayvan modelleri anksiyete düzeyindeki değişiklikleri öğrenmek için bir protokol mevcut. Yükseltilmiş artı labirent takip yazılımı, bir video ile birlikte kullanılan (EPM) testi, çeşitli olası anksiyolitik tedaviler preklinik laboratuvar senaryolarda etkisini belgelemek için güvenilir bir yöntem sağlar.
Yükseltilmiş artı labirent diğer yöntemlere göre daha insancıl bir şekilde laboratuvar kemirgen modelleri üzerinde çeşitli potansiyel anksiyolitik tedavilerin etkisini belgelemek için bir yöntemdir. Bu yöntemin en büyük avantajı, yükseklik ve açık alanlardan kaçınma koşulsuz korkuek, hem karanlık hem de kapalı alanlarda kemirgen içgüdüsel eğilimi dayanır. Collin Park, laboratuvarımdan bir işbirlikçi, prosedürü göstermede yardımcı olacak.
Testten birkaç gün önce, hayvanları gövdelerinden toplayarak ve deneyciye alıştırmak için bir dakika tutarak ele alın. Daha sonra, tedavi için doz hesaplama belirlemek için herhangi bir tedavi başlamadan önce hayvanların vücut ağırlığını ölçmek. Daha sonra, keton takviyesi önce beş gün boyunca gavage tarafından su kullanarak intragastrik gavage yöntemi hayvanları tanımak.
Anksiyete tsay için, yükseltilmiş artı labirent veya EPM Aparat, iki açık ve iki kapalı dört kollu bir artı şekilli aparat kullanın. EPM Aygıtını doğrudan aydınlatmak yerine tavandan dolaylı aydınlatma kullanarak aydınlatın. Dört kol da benzer şekilde aydınlatılmış olduğundan emin olun.
Hareket izleme yazılımının yükleme anahtarını USB 2.0 bağlantı noktasına takın ve yazılımı yükleyin. Ardından, kamerayı deney alanının üzerinde sabitlayın ve deney süresince hareketsiz kalacağından emin olun. Son olarak, kullanım kılavuzunu kullanarak hareket izleme yazılımı sisteminde yeni bir deneme ayarlayın.
Hayvanı deneysel alana yerleştirin. Ardından, zaman kontrol panelindeki başlat düğmesine basarak veri toplama işlemini başlatın. Test odasında, EPM verilerini el ile ve yazılımı kullanarak iki şekilde toplayın.
Kör gözlemciler bir perde ile ayrılır. İzleme işlemi kaydının ene kadar bekleyin veya zaman kontrol panelinde dur düğmesine basın. Daha sonra hayvanı deneysel alandan çıkarın.
Son olarak, analiz aracına erişmek için deneme asistanı çubuğundaki analiz düğmesine basın. Bir raporu çözümlemek ve oluşturmak için denemeleri ve zaman aralıklarını seçin. Deneye başlamadan 30 dakika önce fareleri kafeslerindeki deney odasına transfer ederek başlayın.
EPM'nin dört kolunun kesiştiği yere deneycinin karşısındaki açık kolla bakacak şekilde bir fare yerleştirin. Video izleme yazılımını çalıştırın ve hayvanın davranışını beş dakika boyunca el ile kaydedin. Sonra, eğer hayvan EPM'den düşerse, onu al ve epm'nin düştüğü yere geri yerleştirin.
Bu hayvanın davranışsal verilerini analizden hariç tut. Beş dakikalık testin sonunda, video izleme yazılımını durdurun. Hayvanı EPM'den çıkarın ve ev kafesine geri yerleştirin.
Son olarak, EPM'yi bir dezenfekte deterjanı ve ardından musluk suyu ile temizleyin. Cihazı kağıt havlu ile kurulayın. Kronik beslenmeden sonra, KSMCT grubundaki sıçanlar kontrol grubuna göre açık kollarda çok daha fazla zaman geçirdiler.
KS grubu kontrol grubuna göre merkezde önemli ölçüde daha fazla zaman geçirdi. Ve daha az zaman lke, KS, KSMCT gruplarında kontrol göre kapalı kollarda harcanıyor. KS ve KSMCT gruplarındaki sıçanlar açık kollarda önemli ölçüde daha uzun mesafeler kat ettiler.
LKE, KS ve KSMCT gruplarındaki sıçanlar kapalı kollarda kontrol grubuna göre çok daha az mesafe kat edildiğini gösterdiler. Ayrıca, oral gavaj yedi gün sonra açık kollarda harcanan zaman KE grubunda daha fazla ydı ama KE, KS ve KSMCT grupları için merkezinde azaldı. KE ve KS gruplarında yedi günlük yönetim sonrasında kapalı kollara giriş sayısı da önemli ölçüde azaldı.
Tüm fareleri, deneyciden uzağa bakan kavşakta tutarlı bir malikaneye yerleştirmek çok önemlidir. Kemirgenler üzerinde EPM tsay anksiyolitik etkisi ve etki mekanizmaları dahil beyin alanları etkileyen farklı tedavilerin etkisini araştırmak için uygun ve hassas bir yöntemdir.
Genel Bakış
Bu makale, yükseltilmiş artı labirent (EPM) testi kullanılarak kemirgen modellerinde anksiyete seviyelerinin değerlendirilmesi için bir protokol sunmaktadır. Video takip yazılımıyla birleştirilen bu yöntem, potansiyel anksiyolitik tedavilerin etkilerinin güvenilir bir şekilde belgelenmesine olanak tanır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Davranış Bilimleri
- Farmakoloji
Arka Plan
- Yükseltilmiş artı labirenti, kemirgenlerde anksiyete ile ilişkili davranışları değerlendirmek için tasarlanmıştır.
- Kemirgenlerin açık ve kapalı alanlara yönelik doğal içgüdülerinden yararlanır.
- Bu yöntem, diğer anksiyete değerlendirme tekniklerinden daha insancıl kabul edilir.
- Video takibi, davranışsal veri toplamanın doğruluğunu artırır.
Çalışmanın Amacı
- Çeşitli anksiyolitik tedavilerin kemirgen anksiyete seviyeleri üzerindeki etkisini değerlendirmek.
- EPM testlerini yürütmek için güvenilir bir protokol oluşturmak.
- Tedaviye yanıt olarak zaman içindeki davranışsal değişiklikleri analiz etmek.
Kullanılan Yöntemler
- Test öncesinde kemirgenlerin tutulması ve alıştırılması.
- Kaygı değerlendirmesi için yükseltilmiş artı labirent düzeneğinin kullanımı.
- Veri toplama için video takip yazılımının uygulanması.
- Davranışsal verilerin manuel olarak ve yazılım aracılığıyla analiz edilmesi.
Temel Sonuçlar
- KSMCT ile tedavi edilen sıçanlar, kontrollere kıyasla açık kollarda daha fazla zaman geçirmiştir.
- Açık ve kapalı kollarda kat edilen mesafeler arasında anlamlı farklılıklar gözlemlenmiştir.
- Çeşitli maddelerle yapılan kronik tedavi sonrası davranışsal değişiklikler kaydedilmiştir.
- EPM testi, tedavi etkilerinin anksiyete üzerindeki tespitinde hassas olduğunu kanıtlamıştır.
Sonuçlar
- EPM, kemirgen modellerde anksiyetenin incelenmesi için etkili bir yöntemdir.
- Güvenilir sonuçlar elde etmek için hayvanların tutarlı şekilde yerleştirilmesi kritik önem taşır.
- İleri araştırmalar, anksiyolitik tedavilerin etki mekanizmalarını inceleyebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Endüstriyel Uygulama Uygunluğu
Video takibi ile birleştirilmiş yükseltilmiş artı labirent (EPM) testi, kemirgen modellerde eksojen keton takviyelerinin anksiyolitik etkilerini değerlendirmek için hassas ve insani bir yöntem sunar. Bu yaklaşım, anksiyete yollarıyla bağlantılı davranışsal değişiklikleri nicelleştirerek erken aşama hedef doğrulamasını destekler ve metabolik veya ilaç tabanlı tedavilerin mekanistik risklerini azaltmaya olanak tanır. Yöntem, preklinik keşif süreçlerinde karar verme mekanizmalarına temel oluşturan, tekrarlanabilir ve kantitatif uç noktalar üretir.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Kaygı azalmasının bir göstergesi olarak açık kollarda geçirilen sürenin kapalı kollarda geçirilen süreyle karşılaştırılmasını ölçerek terapötik hipotezleri sorgular.
- Operasyonel Değer: Gözlemci yanlılığını azaltmak ve tekrarlanabilirliği artırmak için video takibi yoluyla körleme yöntemiyle otomatik davranışsal veri toplanmasını sağlar.
- Öngörücü Değer: Keton takviyelerinin anksiyolitik benzeri etkilerini tespit ederek, MSS-modüle eden bileşiklerdeki hedef güvenini destekler.
Tarama ve Deney Geliştirme
- Analiz Hazırlığı: Tutarlı aydınlatma ve hayvan yerleşimine sahip standartlaştırılmış EPM düzeneği, tedavi grupları genelinde güvenilir bazal performans sağlar.
- Kantitatif Çıktılar: Video takibi; açık/kapalı kollarda geçirilen süre ve kat edilen mesafe hakkında hassas metrikler sunarak doz-yanıt karakterizasyonuna olanak tanır.
- Ölçeklenebilirlik: Protokol, boylamsal davranışsal değerlendirme için kronik (83 günlük) ve subkronik/akut (7 günlük) dozaj rejimlerini destekler.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Hastalıkla İlişkisi: Nöropsikiyatrik bozukluk taraması için translasyonel açıdan uygun bir model olan Sprague Dawley sıçanlarında anksiyete ile ilişkili davranışı ölçer.
- Mekanistik Risk Azaltma: Anksiyolitik etkiler ile sedatif karışıklıkları ayırt etmek için açık kol keşfi ile kapalı kol kaçınması üzerindeki etkileri farklılaştırır.
- Translasyonel Süreklilik: Metabolit tabanlı müdahaleleri ölçülebilir davranışsal fenotiplerle ilişkilendirerek ilerleme kararlarını destekler.
İşlem Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
EPM testi, erken hipotez testinden öncü bileşik tanımlamaya kadar uzanan keşif sürecine uygun olup, nöropsikiyatrik ilaç keşfindeki biyokimyasal ve elektrofizyolojik analizları tamamlayan davranışsal fenotipleme sağlar.
- Keşif Biyolojisi: Karıştırıcı motor etkilerden bağımsız olarak, anksiyete devrelerine bağlı davranışsal çıktıları izole ederek yolakların açıklığa kavuşturulmasını destekler.
- Tarama: Bileşik kütüphanelerinin veya nutrasötik müdahalelerin taranması için gerekli olan standartlaştırılmış, tekrarlanabilir anksiyete fenotipleri sağlar.
- Analizler: Tedavi ve kontrol grupları arasında istatistiksel karşılaştırmaya olanak tanıyan kol süresi ve katedilen mesafe verileri üretir.
- Translasyonel Araştırma: Metabolit takviyesi ile anksiyete benzeri davranış arasında bağlantı kurarak biyobelirteç odaklı preklinik doğrulamaya bilgi sağlar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Metabolik, farmakolojik ve genetik modellerde çeşitli anksiyolitik adaylarını değerlendirmek için yeniden kullanılabilir bir davranışsal platform oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Kaygı ile ilişkili davranışlardaki mekanistik belirsizliği azaltarak, hedef etkileşiminde öngörülebilir bir güven sağlar.
- Operasyonel Değer: Körleme video takibi ve tutarlı aparat kurulumu yoluyla standardizasyon, tekrarlanabilirlik ve ölçeklenebilirlik sağlar.
- Stratejik Değer: Lokomotor değişikliklerden kaynaklanan yanlış pozitifleri minimize ederken gerçek anksiyolitik etkileri belirleyerek go/no-go kararlarını iyileştirir.
- Portföy Etkisi: Doğrulanmış davranışsal çıktılara dayanarak, keton bazlı veya MSS-aktif bileşiklerin riskle uyumlu önceliklendirilmesine olanak tanır.
Uygulama Hususları
- Kemirgenlerle çalışma, davranışsal testler ve video takip yazılımı kullanımı konularında uzmanlık gerektirir.
- EPM düzeneğine, USB uyumlu takip sistemine ve kontrollü aydınlatma koşullarına bağlıdır.
- Hayvan alıştırma, dozajlama ve körleme yöntemiyle veri toplama prosedürlerinin ekipler arası standartlaştırılmasını gerektirir.
- Farklı kemirgen modellerine uyarlanırken, türe ve süzgeye özgü bazal anksiyete seviyeleri dikkate alınmalıdır.
- Sadece anksiyete benzeri davranışların ölçümü ile sınırlıdır; tamamlayıcı analizler olmadan bilişsel, motor veya afektif karıştırıcı faktörleri değerlendirmez.
