Mutant melanosit kök hücrelerinden Murine Melanoma başlangıcı uzamsal ve temporal kontrol

Melanom yaygın olarak dünya çapında teşhis edilir, artan insidansı ile. Bu protokoller melanom inisiyasyonunun erken evrelerinin dikkatle kontrol edilmesine izin vererek gelişiminin incelenmesini kolaylaştırır. Melanosit kök hücre aktivasyonunun zamanını ve yerini kontrol ederek, kök hücre popülasyonu ve yeni suş melanom inisiyasyonundaki değişiklikleri ayırt etme yeteneğine sahibiz.

Prosedürü gösteren Dahihm Kim ve Luye An, laboratuvardan yüksek lisans öğrencileri olacaktır. İşleme başlamadan iki ila üç gün önce, her anestezi yedi haftalık fareden sırt derisi tıraş etmek için bir elektrikli düzeltici kullanın. Deney günü, maruz kalan cilde ince bir tüy dökücü krem tabakası uygulamak için pamuklu bir bez kullanın.

Krem eşit olarak uygulandıktan sonra, kremi çıkarmak için temiz pamuklu bezler kullanın, ardından nemli bir bezle silerek artık kremi çıkarın. Sonra tam iyileşme kadar izleme ile her fare ev kafesi için geri dönün. UV-B ışınlaması için, sırt derisini UV-B koruyucu malzemeile kaplayın, böylece sadece istenilen bölge açığa çıkacak ve UV haznesini UV-dirençli bir kapakla kapatın.

Daha sonra uv-b lambasını açarak fareyi uygun deneysel süre boyunca ışınlayın ve fareyi tam iyileşme ye kadar izleyerek boş bir kafese geri döndürün. Deri örneklerini izole etmek için, ötenazi ışınlanmış farelerin sırt derisi bölgesinden herhangi bir saç çıkarmak için bir elektrikli düzeltici kullanın ve bölgeyi temizlemek için açıkta kalan deriyi tüy bırakmayan bir dokuyla hafifçe fırçalayın. Kuyruk tabanının hemen üzerinde keskin makas ile küçük bir kesi yapın ve subdermal bağ dokuları ayırmak için kesi içine büyük, künt makas yerleştirin.

Keskin makas kullanarak, dikkatle doku örneği izole etmek ve temiz bir kağıt havlu üzerine excised deri dokusu yerleştirmek için ilgi cilt bölgesinin kenarı boyunca kesilmiş. Sonra havlu yapışır ve gergin böylece cilt germek için mat forceps kullanın. Tüm numuneler hasat edildiğinde, bir deri numunesi ve kağıt havlu desteğini kırışağa hemen bitişik katlanmış filtre kağıdına yerleştirin ve numunenin düzgün ve katlanmamış veya buruşmamalarına dikkat edin.

Filtre kağıdının kenarlarını zımbalarla kapatın ve kağıdı kırpın. Daha sonra numuneleri %10 nötr tamponlu formalinile oda sıcaklığında üç ila beş saat suda iki beş dakikalık yıkama ile yıkamadan önce tamamen batırın. İkinci yıkamadan sonra, deri dokularından kalan maddeleri dikkatlice çıkarın ve numunelerin kenarlarını pürüzlü olmayacak şekilde kırpın.

Daha sonra, şeritlerin genişliği en fazla beş milimetre olacak şekilde her örnekte üç sagittal kesim yapın ve örneklerin en fazla 20 milimetre genişliğinde olması için enine kesikler yapın. Optimum kesme sıcaklığı veya OCT ortamını içeren bir kriyo kalıbı portre yönlendirmesine yerleştirin ve OCT'nin üzerine dört ila beş parça deri yerleştirin. Tüm parçalar yerinde olduğunda, örneklerIN OCT içinde dikey ve kalıbın tabanına dik olacak şekilde her deri parçasının uzun kenarını kriyo kalıbının altına getirmek için iki çift ince çalgı kullanın.

Daha sonra kalıbı ikinci dudağına ek OCT ile doldurun ve kalıpları kuru buz parçasının düz bir yüzeyine yerleştirin, blok gerektiği gibi donmaya başladığında transfer sırasında kaymış olabilecek deri parçalarını ayarlamak için terlikleri kullanarak. Fareler doğumdan yedi hafta sonra yken sırt derileri telogen içindedir. Telogen sırasında, saç folikülü ve melanosit kök hücreleri bir quiescent dinlenme durumunda olduğu bilinmektedir, ve cilt tıraş tan sonra önemli bir saç büyüme göstermelidir.

Kimyasal depilasyon, ancak, saç folikülü kök hücre aktivasyonu neden olabilir, ilgi bölgesinde önemli saç büyüme neden. Kimyasal depilasyon önemli ölçüde hem saç folikülü ve melanosit kök hücrelerinaktivasyonu neden olabilir gibi, aktif bir durumda melanom eğilimli melanosit kök hücreleri tümörler oluşturabilir ve mikroskobik melanom inisiyasyonu kimyasal depilasyon iki hafta içinde görülebilir. UV-B ışınlama da quiescent tümör inisiyasyon neden olabilir, tümöreğilimli melanosit kök hücrelerden.

Daha da önemlisi, UV-B, foliküler kök hücre nişlerinden foliküler kök hücre nişten foliküler epidermise melanosit kök hücrelerinin doğrudan translokasyonuna neden olur. Ayrıca, UV-B interfolliküler epidermis boyunca melanosit kök hücre kaynaklı kutanöz melanom oluşumunu neden olabilir. Dorsal deriye benzer şekilde, UV-B'ye bağlı melanom inisiyasyonu özellikle kulak derisi gibi diğer cilt bölgelerinde görülebilir.

Nitekim, kontrol kulak derisi ile karşılaştırıldığında, UV-dirençli bez ile kaplı, UV-B maruz kulak derisi melanom inisiyasyon daha yüksek bir yük nedeniyle daha yüksek bir pigmentasyon gösterir. UV-B farklı dozlarda fare cilt ve melanosit aktivitesi üzerinde farklı etkileri olabilir. Bu nedenle, denemebaşlamadan önce ışınlama dozu belirlemek ve optimize etmek önemlidir.