Modifiye Dikişsiz Manşet Tekniği Kullanılarak Murine Servikal Aort Transplantasyon Modeli

Ben Münih'teki LMU'nun Genel, Visseral ve Transplantasyon Cerrahisi Bölümü araştırma laboratuvarlarından Martin Ryll. Bugün size modifiye dikişsiz manşet tekniği ile bir murine heterotopik aort transplantasyonu modeli göstereceğiz. İlk olarak, midazolam, medetomidin ve fentanil intraperitoneal enjeksiyon ile alıcı hayvan anestezi.

Küçük hayvanlar için elektrikli bir saç makası ile servikal lateral bölgenin tüm saç klip ve işlem sırasında kurumasını gözleri önlemek için pamuklu bez ile oftalmik merhem uygulayın. Mikroskop altında bir ısıtma yastığı üzerinde supine pozisyonda hayvan yerleştirin ve yavaşça cilde duyarlı alçı şeritler ile ameliyat masasına bacaklarını bantlayın. Başını geriye doğru eğve ameliyat alanını birkaç kez alkolle temizleyin.

Küçük makas ile sağ alt mandibula juguler kesi bir deri kesi olun. Submandibular bezin sağ alt lob damar pedikül ve mikro makas ile sonraki eksizyon bipolar cautery ile çıkarın. Üst ve alt kısmı bipolar kateter ve mikro makas ile sonraki eksizyon ile ortak karotis arter erişim elde etmek için sağ sternokleidomastoid kas çıkarın.

Çevredeki bağ dokusunu ince prupler ile ayırarak ortak karotis arteri mümkün olduğunca distal ve proksimal olarak harekete geçirin. Ortak karotis arterin ortası etrafında birbirleri arasında en az mesafe ile iki 7-0 ipek ligatürler kravat ve ligatürler arasında ince mikro makas ile ortak karotis arter transect. Proksimal ligatlı ucunu manşetten geçirin ve küçük bir arter kıskaçı ile düzeltin.

Ligatür mümkün olduğunca yakın ligatür ile ligatür çıkarın ve damar duvarlarına zarar vermemeye dikkat ederken 30 gauge iğne ile heparinized tuzlu ile lümen floş. İnce vasküler dilatatörler kullanarak açık lümeni ayırın ve poliamid tüpün üzerine yavaşça çekerek manşetin üzerindeki karotis kütüğütersedin. Hemen gevşek önceden bağlı 7-0 ipek döngü ile ters karotis düzeltmek.

Diğer manşet ile karotis arterin diğer ucunda aynı işlemi gerçekleştirin. Dizmenin içinden distal ligated ucunu geçirin ve küçük bir arter kıskaçı ile düzeltin. Ligatür mümkün olduğunca yakın ligatür ile ligatür çıkarın ve damar duvarlarına zarar vermemeye dikkat ederken 30 gauge iğne ile heparinized tuzlu ile lümen floş.

İnce vasküler dilatatörler kullanarak açık lümeni ayırın ve poliamid tüpün üzerine yavaşça çekerek manşetin üzerindeki karotis kütüğütersedin. Hemen gevşek önceden bağlı 7-0 ipek döngü ile ters karotis düzeltmek. Alıcı hayvanı bir kenara koyun ve aort segmenti ekilene kadar tuzlu ile üst üçte iki nemlendirici.

Alıcı hayvan olarak aynı şekilde donör fare anestezi. Küçük hayvanlar için elektrikli saç makası ile karın ve torasik bölgenin tüm saçlarını kırpın ve işlem sırasında gözlerin kurumasını önlemek için pamuklu bezlerle oftalmik merhem uygulayın. Mikroskop altında bir ısıtma yastığı üzerinde supine pozisyonda hayvan yerleştirin ve yavaşça cilde duyarlı alçı şeritler ile ameliyat masasına bacaklarını bantlayın.

Ameliyat alanını birkaç kez alkolle temizleyin. Küçük makas ile bir orta hat abdominal laparotomi yapmak ve inferior vena kava ortaya çıkarmak için biraz yukarı bağırsak itin. 30 gauge iğne kullanarak Bir cc heparinize tuzlu ile IVC enjekte edin.

Donör hayvan exsanguinate küçük makas ile renal arterlerin altında abdominal aort ve IVC kesin. Gevşek kan emmek için karın içine bir kompres yerleştirin. Makas ile kaburga ikili saptırma yoluyla bir torakotomi gerçekleştirin ve mediasten ortaya çıkarmak için cerrahi bir kelepçe ile ön göğüs duvarı cranially tilt.

Mikro makas ile diyafram doğrudan üzerinde IVC ve yemek borusu kesin. Kesilen IVC ve yemek borusunu tutan forceplarla yukarı doğru titreterek kalbi ve akciğerleri çıkarın ve sonra torasik aort ve dorsal mediastene erişmek için tabanından mikro makasla çıkartın. Herhangi bir interkostal arterlere zarar vermemeye dikkat ederken çevreleyen bağ dokusu ve yağ ince forceps ile ayırarak çevresindeki dokudan torasik aort seferber.

Bipolar kapasitör forceps ile torasik aort tüm dalları cauterize ve mikro makas kullanarak diyafram ve aort kemer arasındaki aort segmentini çıkarmak. Eksponize aort segmentini heparinize salin ile 30 gauge iğne ile yıkayın, kalan kan veya pıhtıları çıkarmak ve grefti alıcı hayvana aktarmak için damar duvarlarına zarar vermemeye özen gösteriyor. Donör aort segmentinin proksimal ucunu ters karotis arterin üstündeki proksimal manşetin üzerine ince preksiklerle çekin ve hemen önceden bağlanmış 7-0 ipek halkası ile düzeltin.

Aort greftinin distal serbest ucunu mikro makasla kesin, böylece greft uzunluğu iki manşet arasındaki mesafeye uy. Ters karotis arterin üstündeki distal manşetin üzerindeki distal ucunu ince pratisk lerle çekin ve hemen önceden bağlanmış 7-0 ipek halkası ile düzeltin. Retrograd perfüzyona izin vermek için önce distal kelepçeyi çıkarın.

Hemostaz elde ettikten sonra, anastomoz tamamlamak için proksimal kelepçe kaldırın. Son olarak, 6-0 sürekli dikiş ile yara kapatın. 28 gün sonra hayvanlar kurban edilir ve mitolojik boyama için greftler korunur.

Bu Van-Gieson'un aort kesitlerinin lekelerinde gösterildiği gibi, Balb/c donörlerinden siyah altı alıcıya kadar tamamen MHC uyumsuz allografted aortlar luminal daralma ile sonuçlanan önemli bir neointimal hiperplazi geliştirmiştir. Öte yandan, siyah altı donörden siyah altı alıcıya sinjenik aort naklinde sadece küçük neointimal hiperplazi gelişti. SM22 karşı immünofloresan boyama, vasküler düz kas hücreleri için bir belirteç, yeşil floresan bu resimde gösterildiği gibi, neointima esas vasküler düz kas hücrelerinden oluşur gösterir.

Murine aort transplantasyonu geç greft yetmezliğinin en sık nedeni olan kronik transplantasyon vaskülopatisinde bir model olarak hizmet vermektedir. Ortotopik abdominal modele göre modifiye manşet tekniğimiz daha az mikrocerrahi ve yüksek başarı oranına yol açarak devam ediyor. Ayrıca manşetin sürekli çapı nedeniyle diğer mikrocerrahi nakil modellerinde görülen vasküler anastomoz varyasyonları da ihmal edilebilir.

Ayrıca, alıcı hayvan aort segmenti ekilmeden önce önce hazırlanır gibi sıcak iskemik zaman deneysel gruplar boyunca sabit tutulur. Modifiye modelimiz diğer laboratuvarların murine aort naklini oluşturmasına yardımcı olmalıdır.