Ultrason Lokalizasyon Mikroskobu Kullanılarak Sıçan Beyin Mikrovaskülatürünün İki Boyutlu Süper Çözünürlüklü Görselleştirilmesi

Araştırmamızın kapsamı, sıçan beyni mikrovaskülatürünün süper çözünürlüklü görüntülemesini elde etmek için ultrason lokalizasyon mikroskobu için bir protokol geliştirmeye odaklanmaktadır. Küçük damarların görüntülenmesinde özel çözünürlük ve penetrasyon derinliklerini dengelemenin zorluklarını ele almayı, sağlıklı ve hastalık durumlarında vasküler yapı ve kan akış dinamikleri hakkında ayrıntılı bilgiler sağlamayı amaçlıyoruz.

Protokolümüz, MRI, CT ve çift ultrason gibi geleneksel yöntemleri geride bırakarak 12 milimetreye kadar penetrasyon derinliklerini korurken, 12,5 mikrometrelik yüksek bir uzamsal çözünürlük elde etme avantajı sunar. Optik tekniklerden farklı olarak, derin beyin bölgelerinin görüntülenmesini, mikrovasküler yapıların yeniden yapılandırılmasını ve kan akış dinamiklerinin eş zamanlı olarak görüntülenmesini sağlar.

Sonuçlarımız, glioblast tümörü ve Alzheimer hastalığı gibi nörolojik bozukluklardaki mikrovasküler değişiklikleri araştırmak için bir yol açmaktadır. Kan akış dinamiklerini ve mikrovasküler mimariyi yüksek çözünürlükte görselleştirme yeteneği, hastalığın ilerlemesini, tedavi etkinliğini ve kas değişiklikleri ile beyin fonksiyonu arasındaki ilişkiyi incelemek için yeni fırsatlar sunar.

[Ekran Okuyucusu] Başlamak için, anestezi uygulanmış fareyi ameliyat masasına yerleştirin. Farenin üst kesici dişlerini, alt çeneyi çubuğun altına yerleştirerek kesici çubuğun çentiğine sabitleyin. Kulak çubuklarını, kulak kanalının biraz önünde ve üstünde olacak şekilde kemik girintisine yerleştirin ve kraniyal yüzeyin yatay kalmasını sağlayın. Stabiliteyi değerlendirmek için başın farklı bölgelerine az miktarda basınç uygulayın. Görüntüleme platformunun yüksekliğine ince ayar yapın ve engelsiz nefes almayı sağlamak için kesici çubuk çentiğini kullanarak sıçan kafasının açısını ayarlayın. Sıçanın gözlerini cerrahi ışıklardan korumak ve nemi korumak için eritromisin merhem veya% 30 gliserin solüsyonu uygulayın. Elde taşınan bir elektrikli kesme makinesiyle, farenin kafasını tüylerin büyüme yönüne karşı tıraş edin, kulaklar arasındaki alanı ve gözlerden boynuna kadar olan alanı kaplayın. Şimdi, sıçanın kafatasının sagital sütürü boyunca, sadece oksipital kemikten başlayarak ve öne doğru yaklaşık dört santimetre uzanan bir kesi yapın. Her iki taraftaki cildi geri çekmek için kanama durdurucular kullanın. İsteğe bağlı olarak, daha fazla erişim için cildi kafatasının üzerinden çıkarın. Periosteumu kafatasından çıkarmak için küçük bir makas kullanın ve sert kemik tabakasını tamamen açığa çıkarın. Kraniyotomiyi, 2,5 milimetre küresel matkap ucuna sahip, el tipi bir mini kraniyal matkapla gerçekleştirin. Kemiği aşındırmak için hafifçe vurun, her seferinde iki ila üç saniye delin, merkezden başlayın ve dışa doğru ilerleyin. Kalıntıları soğutmak ve durulamak için delme alanına her iki dakikada bir yaklaşık bir mililitre% 0.9 sodyum klorür çözeltisi enjekte edin. Beyaz kemik dokusu artık tutarlı bir şekilde bağlı görünmediğinde daha ince bir milimetrelik matkap ucuna geçin. Merkezi majör kan damarları koyu kahverengi olarak açıkça görülene ve çevredeki doku pembe ve mikro damarlar hafif kırmızımsı görünene kadar delmeye devam edin. Kontrast maddeyi hazırlamak için, SF6 gazını ve liyofilize kontrast madde tozunu beş mililitre% 0.9 Sodyum klorür içinde çözün. Karışımı, mililitre başına sekiz mikrolitrelik bir son SF6 konsantrasyonu ile bir mikro kabarcık veya MB süspansiyonu oluşturmak için kuvvetlice çalkalayın. MB süspansiyonunun 0.8 mililitresini bir mikroenjeksiyon pompasına bağlı bir mililitrelik şırıngaya çekin. Sıçanın kuyruk damarına bir kateter ile 26 gauge kalıcı bir iğne yerleştirin ve enjekte edin. Görüntülemeden önce, bir kelepçe ile donatılmış beyin stereotaksik aletinin manipülatör koluna merkezi frekansı 15.625 megahertz olan bir prob monte edin. Ultrason probunu doğrudan açıkta kalan sıçan beyninin üzerine yerleştirin ve optimum sinyal iletimini sağlamak için açıkta kalan beyin yüzeyine birleştirme jeli uygulayın. Yazılımın, bir sargı beyin atlasını motor hareket kontrol programlarıyla entegre eden ana arayüzünü açın. BGMA noktasını başlangıç noktası olarak ayarlayın ve probun yörüngesini ve karşılık gelen sıçan beyin dilimi konumunu izlemek için yazılımın gerçek zamanlı ekranını kullanın. BGMA eksi bir milimetre gibi hedef görüntüleme düzlemini seçin. MATLAB 2021a yazılımını başlatın ve MATLAB 2021a'da veri toplama komut dosyasını girin. Kök dizinde, çalışma zamanı ortamını etkinleştirmek için komut satırı penceresine "activate" yazın. Ardından, ilgilenilen bölgeyi etkili bir şekilde yakalamak için veri toplama başlangıç ve bitiş derinliklerini sırasıyla beş ve 120 dalga boyuna ayarlayın. Görüntü çözünürlüğünü ve kontrastı artırmak için düzlem dalgası iletim direksiyon açılarını 2,5 derecelik artışlarla eksi beş dereceden beş dereceye ayarlayın. Ultrason lokalizasyon mikroskobu, 12 milimetreye kadar derinliklerde mikro damarların net bir şekilde görüntülendiğini ortaya koydu. Tam genişliğin maksimumun yarısında yapılan analiz, tespit edilebilir en küçük kap çapını 13 mikrometre olarak gösterdi. Fourier halkası korelasyonu, mikrovasküler görüntülemenin uzamsal çözünürlüğünü 12.5 mikrometre olarak doğruladı. Sıçan beyninin enine kesitsel bir dilimindeki kan akış yönleri, sırasıyla mavi ve kırmızı renklerle temsil edilen küçük kortikal arterlerde aşağı doğru akış ve küçük damarlarda yukarı doğru akış gösterdi. Bir hız haritası, daha büyük gemilerde daha yüksek akış hızları gösterdi ve hızların çoğu saniyede 10 ila 25 milimetre aralığında yoğunlaştı. Glioblastoma sıçan modelinin görüntülenmesinde anormal vasküler dilatasyon, tümörün yakınında yapısal düzensizlikler, tümör bölgesinde değişmiş kan akış paternleri ve tümörün içinde ve çevresinde heterojen bir vasküler akış görüldü.