Huoxiang Zhengqi Ağız Sıvısında Bilinmeyen Bir Bileşiğin Yapısal Analizi için Doğrusal İyon Kapanı Kütle Spektrometrisine Dayalı Teknik Yaklaşım

Huoxiang Zhengqi ağız sıvısındaki karmaşık bileşenleri tanımlamak ve karakterize etmek için çok aşamalı bir kütle spektrometrisi parçalanma yöntemi geliştirildi. Geleneksel tandem kütle spektrometrisi bilinmeyen bileşik yapıları çözemez. Çok aşamalı kütle spektrometrisi, kapsamlı yapısal açıklama için daha derin parçalanma sağlar.

Ultra performanslı sıvı kromatografi hazırlığı için, Xcalibur yazılımını açmak için çift tıklama yaparak başlayın. İndirmeye Hazır'a tıklayın, ardından Direct Control'a tıklayın. Açılır pencerede Pompa Modülü sütununa tıklayın ve yüzde B'yi 50, yüzde C sıfıra ve yüzde D'yi sıfıra ayarlayın.

Motor düğmesine tıklayarak açık duruma geçin. Daha fazla seçeneğe tıklayın, akışı dakikada beş mililitreye ve açılır pencerede zamanı 180 saniyeye ayarlayın. Temizleme tuşuna tıklayın, ardından açılır pencerede uyarı olmasına rağmen Execute'a tıklayın.

Ana yazılım penceresine dönüp Sequence Setup View seçeneğine tıklayın. Düzenlenen şablonu aktarmak için Aç tuşuna tıklayın. Metod adına sağ tıklayın ve Dosyayı Aç'a tıklayın.

Yazılım ana penceresinde, ilk kütleyi 100 kütle/şarj oranına ve son kütleyi 1200 kütle-şarj oranına ayarlayın. Yöntemi kaydetmek için Kaydet'e tıklayın. Run Sequence'e tıklayın, After sequence set sisteminde Bekleme seçeneğini seçin, ardından açılır pencerede Okay tuşuna tıklayın.

Numune enjeksiyonunun tamamlanmasını bekleyin. Yol Haritası Görünümü'ne tıklayın, ardından Qual Tarayıcı penceresini açmak için Qual Tarayıcı simgesine tıklayın. Aç düğmesine tıklayın, RAW formatında veri dosyasını seçin ve açmak için çift tıklayın.

Kromatomografi penceresine sağ tıklayın ve Aralıklar seçeneğine tıklayın. Tarama filtresi bölümünde ESI full MS'yi seçin. Ve plot type bölümünde TIC'i seçin, sonra Tamam'a tıklayın. Gösterilen toplam iyon kromatogramını gözlemleyin.

Kütle spektrum penceresindeki pin düğmesine tıklayın. Kromatogram penceresinde, en güçlü göreceli bolluğa sahip bir zaman bölgesini seçmek için tıklayın ve kaydırın. İlgili kütle spektrumu iyonları gözlemleyin ve kütle ile yük oranı değerlerini kaydedin.

Enstrüman kurulum penceresini açın. N eşit iki satırın ana kütle sütununu bulun ve daha önce kaydedilmiş kütle ile yük oranını girin. Yöntemi kaydetmek için Kaydet'e tıklayın.

Yazılım penceresinde dizis kurulum görünümüne geri dönün, dosya adını değiştirin ve diziyi kaydetmek için Kaydet'e tıklayın. Run Sequence'e tıklayın, ardından açılır pencerede Okay tuşuna tıklayın. Numune enjeksiyonunun tamamlanmasını bekleyin.

Qual Browser penceresine gidin, Aç'a tıklayın, RAW veri dosyasını seçin ve açmak için çift tıklayın. Kromatomografi penceresine sağ tıklayın ve Aralıklar seçeneğine tıklayın. Tarama filtresi bölümünde, grafik türü bölümü MS.In ESI'yi tam seçin, TIC'i seçin ve kromatogramı görüntülemek için Tamam'a tıklayın.

Kütle spektrum penceresinde pin düğmesine tıklayın. En güçlü göreceli bolluğa sahip bir zaman bölgesi seçin ve kütle spektrumu iyonları gözlemleyin. Kütle spektrometrisinin bir sonraki seviyesi için kütle-şarj oranı değerlerini kaydedin.

Cihaz kurulum penceresinde, N eşit üç satırın ana kütle sütununu bulun ve daha önce kaydedilen kütle ile şarj oranını girin. Yöntemi kaydetmek için Kaydet'e tıklayın. Daha önce gösterildiği gibi, örnek enjeksiyonu ve analizini tamamlamak için veri görüntüleme prosedürünü tekrarlayın.

Ham veri dosyasını açtıktan sonra, kütle spektrum penceresindeki pin düğmesine tıklayın ve değişen parça iyon zirvelerini gözlemleyin. Enstrüman kurulum penceresinde Act Type sütununa gidin ve CID'ye tıklayın. Sonra çarpışma modunu değiştirmek için PQD veya ETD seçin.

Normalize Çarpışma Enerjisi sütununda 35'e tıklayın ve çarpışma enerjisini ayarlamak için 50'ye değiştirin. Ebeveyn iyon ve parçalanma iyonları çizim yazılımında, ana iyon yapısı, bileşik adı ve kütle-şarj oranı değeri dahil olmak üzere çizim yazılımında çizin. Örneğin, parçayı kütle-yük oranı 461.15 ile tanımlayın ve tandem kütle spektrometrisi spektrumunda kütle-yük oranı 623.21 olan öncü iyonunu inceleyin.

Kütle farkını hesaplayın. Kütle ve yük oranı 461.15 olan ara iyonun daha fazla parçalanmasını analiz edin. MS küp içinde kütle-yük oranı 315.09 olan bir ürün iyonu üretmek için, tüm parçaların bağlanma konumu ve bağlantı analizlerine dayanarak kütle farkı hesaplanın.

Bilinmeyen bileşiğin nihai yapısını 623.21 kütle-yük oranıyla çıkarın. 623.21 kütle-yük oranına sahip bilinmeyen bileşik, bir heksoz birimi kaybetti ve 461.15 kütle-yük oranına sahip bir parça iyon verdi. Ara ünitenin üçüncü ölçekli kütle spektrometrisi parçalanması, bir ramnoz biriminin kaybından sonra 315,09 kütle-yük oranına sahip neobyakangelikol üretti.

Neobyakangelicol'ün dörtlü kütle spektrometrisi, 135,09 kütle-yük oranına sahip bir parça iyon üretti. Bilinmeyen bileşiğin yapısı, çok aşamalı parçalanma deseninden çıkarılmıştır. Kütle-yük oranları 545.41 ve 365.12 olan bilinmeyen bileşikler aynı parçalanma yöntemiyle türetilmiştir.

Bu protokol, tıbbi bitkilerde ve Çin patentli ilaçlarda daha bilinmeyen bileşiklerin ayrıntılı analizini ve yapısal karakterizasyonunu mümkün kılar. Ana bileşenlerin temel yapısının net bir şekilde anlaşılması, bu protokolün doğru parçalanması ve analizi için gereklidir. Bu prosedür, bileşik tanımı ve karşılaştırmalı analiz için çok aşamalı bir kütle spektrometrisi parçalanma veritabanının geliştirilmesini sağlar.