تلطيخ أحمر النيل من C. ايليجانس: طريقة لتصور قطرات الدهون في الثابتة

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

0 مشاهدات • 3:34 د • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- عند تصور قطرات الدهون ، تبدأ عضيات التخزين داخل الخلايا للدهون المحايدة بإضافة محلول منظف ، مثل محلول يحتوي على Triton X-100 ، إلى العينة. سيؤدي ذلك إلى اختراق خلايا الدودة. بعد ذلك ، قم بإصلاح العينة بالتركيز المناسب من الأيزوبروبانول ، على سبيل المثال 40٪.

ثم أضف النيل الأحمر إلى العينة واحميها من الضوء ، لأن الصبغة حساسة للضوء. يسمح التثبيت للصبغة بالوصول إلى قطرات الدهون في جميع أنحاء. النيل الأحمر هي صبغة محبة للدهون يعتمد طيف انبعاثها الفلوري على قطبية البيئة الدهنية المحلية.

عند التعرض للدهون القطبية ، مثل الدهون الفوسفورية ، يكون طيف انبعاث النيل الأحمر في الأطوال الموجية الحمراء الأعلى. عند التعرض للدهون المحايدة ، مثل ثلاثي الجلسرين واسترات الستيرول في النواة المحايدة لقطرات الدهون ، يتحول طيف انبعاث النيل الأحمر إلى الأطوال الموجية السفلية من الذهب الأصفر.

لذلك ، استخدم القناة الخضراء لمجهر الفلورسنت ، والتي ستجمع انبعاثات الطول الموجي للذهب الأصفر ، لتصور تلطيخ النيل الأحمر لقطرات الدهون في جميع أنحاء. في مثال البروتوكول ، سنرى إجراء تلطيخ أحمر النيل وتصوير قطرات الدهون في عينات ثابتة.

- لإجراء تلطيخ الدهون باللون الأحمر النيلي ، فإن الديدان الصفيحية على وسط نمو الديدان الخيطية ، أو NGM ، بذرة السجل المتأخر OP50 E. coli ، وتنمو الديدان عند 20 درجة مئوية إلى مرحلة L4 المبكرة. اغسل الديدان ب 1 ملليلتر من محلول PBST وانقل تعليق الدودة إلى أنبوب ميكروفوج سعة 1.5 ملليلتر.

قم بالطرد المركزي للديدان بقوة 560 مرة من الجاذبية لمدة دقيقة واحدة ، ثم قم بإزالة المادة الطافية وكرر غسل PBST حتى يتم إزالة الإشريكية القولونية من التعليق. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من 40٪ من الأيزوبروبانول ، أو 60٪ لتلوين ORO ، واحتضن العينة في درجة حرارة الغرفة لمدة ثلاث دقائق.

- تعد إضافة الأيزوبروبانول أمرا بالغ الأهمية للنفاذية المناسبة للديدان قبل تلطيخها.

- قم بالطرد المركزي للديدان عند 560 مرة من الجاذبية لمدة دقيقة واحدة وإزالة المادة الطافية دون تعطيل حبيبات الدودة.

- من المهم تقليل التعرض للضوء أثناء خطوات الطرد المركزي.

- الآن ، أثناء وجودك في الظلام ، أضف 600 ميكرولتر من محلول عمل NR المعد مسبقا لكل عينة. اقلب الأنابيب ثلاث مرات واخلط الديدان والمحلول بالكامل. ثم احتضان العينة في الظلام في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين.

بعد الحضانة ، قم بالطرد المركزي للديدان وإزالة المادة الطافية. ثم أضف 600 ميكرولتر من PBST واحتضان العينات في الظلام لمدة 30 دقيقة لإزالة بقعة NR الزائدة. بعد تدوير العينات مرة أخرى كما كان من قبل ، قم بإزالة جميع المواد الطافية باستثناء حوالي 50 ميكرولترا من المادة الطافية

16:07

الكيمياء الحيوية والعليا تقييم مجهرية مرت من كتلة الدهون في Caenorhabditis ايليجانس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:08

زراعة الطحالب الخضراء في فقاعة العمود Photobioreactors وفحص للدهون محايدة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:12

مقايسة علي أساس الفلورية لتوصيف وتحديد كميات الدهون التجميعية في تشكيل الأمعاء البشرية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:22

تصور انواع معينة ايليجانس استخدام الصبغة الحيوية محبة للدهون ، صلاح الغيدان

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:32

تلطيخ أحمر النيل: تقنية للكشف عن الدهون المحايدة داخل الخلايا وقياسها في الطحالب

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:37

تلطيخ قطرات الدهون لخلايا ذبابة الفاكهة اليرقات: تقنية لتقييم تراكم قطرات الدهون في ظل الظروف الطبيعية والمجهدة باستخدام صبغة قائمة على BODIPY

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:46

التحديد الكمي لوفرة الدهن وتقييم توزيع الدهن في ايليجانس كاينورهابديتيس "الأحمر النيل" و "النفط تلطيخ س الأحمر"

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:37

التشريح وتلطيخ الدهون القطرة من البويضات في يرقات دروفيا

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:12

تحليل قطرات الدهون الملطخة بالفلورسنت مع إعادة بناء 3D لتقييم التنكس الدهني الكبدي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:37

تقييم حجم قطرات الدهون والاندماج في الخلايا الكبدية البقرية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 22 أغسطس 2026