التشخيص والتشريح والأنسجة عينة مختارة كوكتيل في الجرذان والفئران

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء عملية تشريح أساسية للقوارض. يتم تحقيق ذلك أولاً من خلال تسجيل المعلومات الأساسية عن الحيوان، ثم تتمثل الخطوة الثانية من الإجراء في فحص الأحشاء.

تتمثل الخطوة الثالثة في جمع عينات مثل الأعضاء أو العقد اللمفاوية المساريقية. وفي النهاية، يمكن تحديد الحالة الصحية للحيوان من خلال الفحص الهيستوباثولوجي أو تقنيات أخرى. وبشكل عام، يواجه الأشخاص المبتدئون في إجراء عملية التشريح صعوبة لأن تعلم تشريح القوارض يتم أثناء الممارسة العملية.

يمكن لهذه الطرق أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية حول صحة الحيوانات في مستعمرة بحثية. ويُعد العرض المرئي لهذه التقنيات أمراً أساسياً، حيث يتطلب تعلم مواقع الأنسجة المختلفة وكيفية التمييز بين الأنسجة الطبيعية وغير الطبيعية وقتاً. وقبل القيام بعملية القتل الرحيم للحيوان، يجب جمع معلومات عن تاريخه وتسجيل خصائصه الحالية مثل الحالة البدنية، والسلوك، والجنس، والعمر، والوزن، والسلالة، وما إلى ذلك.

يعد هذا السجل بمثابة عمر حيوي للشخص الذي سيقوم بفحص الأنسجة قبل قتل الحيوان رحمةً. تأكد من استخدام معدات الوقاية الشخصية المناسبة. قم بتجهيز لوحة تشريح، وملقاط، ومقص، وملصقات للحاويات، ومادة مثبتة، وأوساط زراعية، وأوعية تجميع.

بعد القتل الرحيم للحيوان، قم بتقييم حالته البدنية، وافحص وجود أي تشوهات في الجلد والفراء، أو هزال، أو جفاف. وابحث أيضاً عن أي أدلة على تدخلات اصطناعية، أو غرسات، أو ندبات جراحية على جسم الحيوان. بعد ذلك، استخدم مجهراً تشريحياً لفحص جميع الفتحات الخارجية بالتفصيل.

وتشمل هذه الفتحات الأذنين، والعينين، والأنف، والفم، والشرج، والأعضاء التناسلية. الآن، ضع الحيوان على ظهره على لوحة التشريح، وارفع جلده باستخدام الملقط واستخدم المقص لفتح الجلد من الشرج وصولاً إلى الذقن. بعد ذلك، اقلب الجلد إلى الجانبين واقطع عبر جدار البطن والقفص الصدري.

اكشف عن الأحشاء الصدرية عن طريق إجراء شقين جانبيين على طول كل جانب من القفص الصدري. اقطع الحجاب الحاجز. ثم قم بإزالة القفص الصدري عن طريق القطع عرضياً في الجزء العلوي من عظمة القص.

الآن، افحص أعضاء الصدر والبطن المكشوفة. دوّن أي تغيرات في اللون، أو روائح غير معتادة، أو اختلافات في الحجم، أو وجود أعضاء مفقودة أو مزاحة من مكانها. افحص قوام أسطح الأعضاء وسجل أي كتل نسيجية أو جيوب ممتلئة بالسوائل.

لاحظ أيضاً وجود أي سوائل في أي من التجويفين. تابع الفحص في القناة الهضمية. افحص المساريق للتحقق من وجود عقد لمفاوية متضخمة أو كتل نسيجية.

صف محتويات القناة الهضمية وافحص بدقة ما إذا كان هناك تسمك في الجدران، أو وجود كتل، أو نزيف. ولفحص الجزء الداخلي من الكليتين، استخدم شفرة لإجراء قطع طولي في الكلية اليسرى وقطع عرضي في الكلية اليمنى بعيداً عن خط المنتصف. افحص النسيج الحشوي بحثاً عن أي تشوهات.

الآن، افحص الجهاز البولي التناسلي في الذكور. حدد الحويصلات المنوية، والخصيتين، والبربخ، والحالبين، والغدد حول البربخ في الإناث. حدد الرحم، والمبيضين، والحالبين.

افحص الجهاز البولي التناسلي للبحث عن أي انسدادات، أو جيوب سوائل، أو نزيف، أو تشوهات أخرى. وبعد الانتهاء من هذه الفحوصات، قم بعزل واستئصال الأعضاء المستهدفة لإجراء مزيد من الفحص. وعادةً ما يتم جمع القلب والكبد والكليتين والطحال أثناء عملية الاستئصال.

اغمر كل عضو في مادة مثبتة أو اتبع الخطوات الأولى من بروتوكول يتطلب هذه الأنسجة، مثل التجميد أو الكيمياء النسيجية المناعية، للحصول على تثبيت مناسب. وبشكل عام، تُغمر الأنسجة في مادة حافظة مثل 10%NBF بنسبة 20 حجماً من المثبت إلى حجم واحد من النسيج. عند العمل مع الجرذان، قم بجمع الشفط القصبي قبل الشفط الأنفي.

ابدأ بإزاحة الجلد في الأنسجة تحت الجلد بعيداً عن المنطقة العنقية، وبذلك يتم كشف الغدد اللعابية والعضلات العنقية. ثم قم بإزالة تلك الأنسجة لكشف الرغامي. اصنع شقاً بطول 3 mm في الرغامي وأدخل ماصة محملة بـ 1 mL من سائل أخذ العينات في تجويف الرغامي بحيث يكون موجهاً بشكل ربعي.

قم بدفع سائل أخذ العينات ببطء عبر الرغامي وصولاً إلى الرئتين ثلاث مرات. بعد ذلك، اسحب سائل أخذ العينات وأخرج الماصة من الرغامي. لن يعود كل السائل إلى الماصة.

لذلك، كرر العملية إذا كانت هناك حاجة إلى المزيد من السائل. للاختبار في الفئران، ولأخذ عينة من الشفط الأنفي أو الشفط القصبي، يتم الوصول إلى وحدة ATU البلعومية الأنفية باستخدام مقص معقم.

افصل المفصل الفكي الصدغي وأبعد الفك السفلي عن الفك العلوي، مما يؤدي إلى كشف الفتحة الأنفية البلعومية لجمع المسحة الأنفية. أدخل ماصة محملة بـ 1 mL من سائل أخذ العينات في الفتحة الأنفية البلعومية للفأر، أو في التجويف الرغامي للجرذ. يجب توجيه الماصة نحو الجهة القحفية ودفعها للداخل.

بهذه الطريقة يلامس الطرف الحنك الأنفي. بمجرد وصوله إلى هناك، يتم حقن سائل أخذ العينات ببطء. وعندما يدخل السائل إلى التجويف الأنفي، سيشكل أسطحاً مقعرة عند الفتحة الأنفية، كما يجب أن يكون مرئياً من خلال الحنك الفموي الشفاف.

ومع ذلك، إذا خرج السائل من الفم، فأعد توجيه الماصة. وبمجرد إتمام عملية الحقن بالكامل، اسحب سائل العينة من التجويف الأنفي إلى الماصة، ثم قم بإزالة الماصة. ابدأ بالإمساك بالقصبة الهوائية باستخدام الملقط وقصها من نقطة تقع فوق الملقط مباشرة.

بعد ذلك، اسحب القصبة الهوائية برفق إلى الأعلى، مع قص الروابط النسيجية حتى يمكن استئصال مجموعة الأنسجة الصدرية بالكامل. الآن، ضع الرئتين بشكل مسطح على سطح العمل، واربط قطعة من خيط الجراحة أو خيطاً عادياً بشكل فضفاض حول القصبة الهوائية. لا تشد العقدة، وإلا لن تتمكن من إدخال الإبرة في القصبة الهوائية.

الآن، املأ حقنةً بالمثبت وأدخل الإبرة في فتحة الرغامى مع تثبيت الرغامى بالإبرة. وباستخدام الملقط، املأ الرئتين بالمثبت ببطء حتى يتم نفخهما بالكامل. سيختلف حجم المثبت وفقاً لعمر الحيوان وسلالته وحالته الصحية.

إذا كانت الأنسجة غير منفوخة بما يكفي فستبدو مسطحة، أما في حالة النفخ الزائد، فسيتسرب سائل رغوي من النسيج بمجرد ملئه؛ لذا يجب شد مادة الخياطة أو الخيط المحيط بالقصبة الهوائية لمنع التدفق العكسي للمثبت خارج الرئتين. ثم ضع الرئتين المنفوختين في المثبت. ضع الجثة على لوح تشريح نظيف في وضع الاستلقاء البطني واستخدم المقص والملاقط لإزالة الجلد والعضلات التي تغطي العجينة.

بعد ذلك، قم بفصل رأس الجثة باستخدام مقص صغير. أدخل الشفرة السفلية في الثقبة العظمى وقص عبر الخط الناصف للجمجمة بحركة تصاعدية. والآن، قم بكشف الدماغ باستخدام الملقط عن طريق فتح الجمجمة.

إذا فضل اختصاصي علم الأمراض قطع مقاطع من الدماغ بينما لا يزال داخل الجمجمة، فيوضع الجمجمة مع الدماغ المكشوف فوراً في 10%NBF. وخلاف ذلك، يتم الإمساك بالرأس من حول الأنف باستخدام ملقط أو الأصابع، ثم تُقلب الجمجمة برفق بحيث تساعد الجاذبية في سقوط النسيج من الجمجمة. بحذر، يتم تمرير ملقط منحني على طول الحافة الخارجية للدماغ بدءاً من الفصوص الشمية.

استمر في تحريك الملقط على طول الجمجمة باتجاه المخيخ، مع قرص الأعصاب برفق باستخدام الملقط نفسه. وعند تحرر الدماغ، وضعه في المادة المثبتة؛ ولتحديد موقع العقد اللمفاوية المساريقية أولاً، حدد موقع الأعور الكبير الذي يتخذ شكل فاصلة في الأمعاء. وتتمثل العقد اللمفاوية المساريقية في الكتل النسيجية الصفراء البيضاوية أو الكروية الموجودة في المساريق المجاورة للأعور.

غالباً ما تكون هذه العقد أكثر سمكاً وصلابة في ملمسها مقارنةً بالمساريق والدهون المحيطة بها. قد يكون استخدام منظار التشريح مفيداً للتمييز بين الأنسجة في البداية، ولكن مع اكتساب الخبرة لن يكون ذلك ضرورياً. وباستخدام الملقط والمقص، قم بعزل العقد اللمفاوية المساريقية، ثم انقلها إلى أنبوب تخزين لاستخدامها في الزرع، أو تفاعل البوليميراز المتسلسل PCR، أو الفحص النسيجي المرضي.

بعد الانتهاء من البروتوكول، تتوفر لأخصائي علم الأمراض أو العالم البيانات التالية: تقرير مكتوب عن الحالة الموضوعية والذاتية عند القتل الرحيم، ووصف موضوعي للأنسجة قبل تثبيتها، وجميع الأعضاء الرئيسية في التجويفين البطني والصدري محفوظة في السائل المثبت، والدماغ والعقد الليمفاوية المساريقية، وعينات من الشفط الأنفي والشعبي. وبمجرد إتقان هذه العملية، يمكن أن يستغرق التشريح المختصر أقل من 30 دقيقة.

أثناء تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر تسجيل ملاحظاتك حول حالة الحيوان وأنسجته. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكون لديك معرفة جيدة بكيفية إجراء تشريح كامل لجثة القوارض، بما في ذلك جمع الرئتين المروية، والعقد الليمفاوية المساريقية، والدماغ.