استئصال المبيض و17β استراديول، مع تبديل في الجرذان والفئران: تظاهرة البصرية

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحقيق تحكم صارم في تركيزات الإستروجين في المصل، والتي تكون متقلبة بطبيعتها، في إناث الجرذان والفئران. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إزالة المبيضين عبر الجذر الظهري. بعد ذلك، يتم تحضير كبسولات مرنة من الجل ومزيج من النوتيلا.

أخيرًا، يتم إدخال كبسولة تحت الجلد، أو يتم إعطاء خليط النوتيلا عن طريق الفم. وفي النهاية، يمكن الحصول على النتائج باستخدام المقايسة المناعية الإشعاعية التي تظهر تركيزات مستقرة أو متذبذبة من 17 beta estradiol في المصل لطريقتي الكبسولة والنوتيلا على التوالي. وتتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنيات مقارنة بالطرق الحالية مثل الكريات بطيئة التحرر، في أنه قد ثبت أنها تنتج تركيزات فسيولوجية من estradiol لفترات زمنية طويلة.

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال الإستروجين، مثل الاختلافات في التأثيرات بين طرق الإعطاء والجذور والجرعات. بعد تخدير الحيوان، ضعه في وضعية الانبطاح على لوحة تسخين متصلة بميزان حرارة شرجي. قم بتطبيق IGEL ولتسكين الآلام بعد الجراحة في الجانب الوحشي من رقبة الحيوان عن طريق الحقن تحت الجلد.

يتم حقن 5 mg/kg من IL في محلول ملحي في المنطقة الأمامية من مبرد العرف الحرقفي في مساحة 4×4 cm. بعد ذلك، يتم تطهير المنطقة بمطهر قبل تغطية الحيوان بملاءة جراحية بها فتحة بمقاس 4×4 cm. يتم إجراء شق في الخط الناصف بطول 2 إلى 3 cm، ثم يتم تسليك الجلد بشكل غير حاد من اللفافة الكامنة تحته، على بُعد 1 cm جانبياً من الخط الناصف.

قم بعمل شق آخر عبر اللفافة. ثم، وبأقل عمق ممكن، قم بإجراء تشريح كليل جانبيًا تحت هذه اللفافة حتى يتم الوصول إلى التجويف البطني. باستخدام الملقط، أمسك بالنسيج الدهني الذي يحيط بالمبيض في التجويف البطني واسحبه للخارج برفق.

حدد مكان المبيض واربط القرون والأوعية الرحمية على مسافة 0.5 إلى واحد سنتيمتر من هذا التركيب. استأصل المبيض والأنسجة الدهنية المربوطة، ثم أعد الأنسجة المتبقية إلى التجويف البطني.

قم بإجراء شق آخر في اللفافة المقابلة واستأصل المبيض الآخر. أغلق الجروح، وإذا لم يتم إعطاء 17 beta estradiol على الفور، فاترك الحيوان حتى يستيقظ من التخدير.

ضع الحيوان في قفص مدفأ لمدة ساعتين على الأقل بعد الجراحة. يتم إيواء الجرذ بشكل منفصل خلال الأيام القليلة الأولى بعد العملية الجراحية. بعد 24 ساعة من الجراحة تحت الجلد.

احقن الحيوانات بخمسة ملجم/كجم أخرى من IL لإعطاء 17 beta estradiol عبر كبسولات scholastic. اخلط الكمية المطلوبة جيداً في زيت السمسم. وباستخدام الملاقط، قص أنابيب scholastic بطول 3 سم وأعواد تطبيق خشبية بطول 5 مم لسدها.

أدخل سدادة خشبية واحدة في الكبسولة التعليمية قبل حقن محلول 17 beta estradiol في زيت السمسم. لملء الكبسولة بالكامل، قم بتغطية الطرف المفتوح من الكبسولة التعليمية برفق باستخدام سدادة خشبية أخرى. تُحضن الكبسولات في محلول 17 beta estradiol المتبقي طوال الليل قبل عملية الزرع.

بعد إغلاق شقوق الاستئصال، قم بحلاقة وتطهير منطقة مربعة بمساحة 2 × 2 سم على الجانب الظهري من رقبة الجرذ. قم بعمل شق بطول 1 سم، ثم قم بالتسليك جانبياً وبشكل كليل. قم بتشريح جيب تحت جلدي لتوفير مساحة كافية للكبسولة.

امسح الكبسولة التعليمية وأدخلها برفق من خلال الشق الجراحي. بعد ذلك، أغلق الشق باستخدام غرزة جراحية. تأكد من أن الكبسولة لا تسبب ضغطاً على الجلد قدر الإمكان، خاصة حول منطقة الجرح.

لاستخدام كريمة المكسرات "نوتيلا" كوسيلة لإعطاء الإستروجين، قم بإذابة 17 beta estradiol تماماً في زيت السمسم، ثم اخلط زيت السمسم مع كريمة المكسرات. قم بتحضير كريمة مكسرات وهمية خالية من 17 beta estradiol لمدة خمسة أيام قبل بدء التجربة. قم بتدريب الجرذان على تناول كريمة المكسرات الخالية من الهرمونات من اليوم الأول وحتى اليوم الثالث.

قم بتدريب الحيوانات في مجموعات خلال اليومين الرابع والخامس. قم بتغذيتها على كريم المكسرات في أقفاص منفصلة طوال فترة التجارب. ضع الحيوانات في أقفاص منفصلة عند تغذيتها على المصل الفسيولوجي لكريم المكسرات.

تتراوح تركيزات 17 beta estradiol، التي تهدف الطرق الحالية إلى إعادة إنتاجها، ما بين 5 إلى 140 picograms per milliliter للجرذان، ومن 5 إلى 35 picograms per milliliter للفئران. كما هو موضح هنا. وذلك عند إعطائها لجرذان من سلالة Sprague Dawley الإناث بوزن 300 gram.

تنتج الكبسولات المرنة تحت الجلد تركيزات من 17 beta estradiol في المصل تتناقص ببطء من حوالي 40 picograms per milliliter في اليوم الثاني إلى 10 picograms per milliliter بحلول اليوم 35. ومع ذلك، يمكن توقع وصول تركيز المصل إلى ذروة تبلغ حوالي 1000 picogram per milliliter فور الإعطاء، ثم ينخفض إلى النطاق الفسيولوجي خلال ثماني ساعات عند إعطاء الكبسولات لإناث فئران C 57 black six بوزن 25 gram.

انخفض تركيز المصل ببطء من حوالي 90 picograms per milliliter في اليوم الثاني إلى 25 picograms per milliliter في اليوم 35 عند إعطائه عبر كريم الأنف لجرذان من سلالة Sprague Dawley بوزن 300 grams. وقد تذبذبت المستويات الفسيولوجية لـ 17 beta estradiol يومياً بين 10 إلى 70 picograms per milliliter في الفئران.

تراوحت مستويات 17 beta estradiol بين 20 و 120 picograms per milliliter. وبمجرد إتقانها، يمكن تنفيذ تقنية الاستئصال وزرع الكبسولة في غضون 10 دقائق إذا تم تنفيذها بشكل صحيح. وأثناء محاولة إجراء هذه العملية، من المهم تذكر الالتزام الصارم بالإرشادات الصحية.