$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
الإكسوسومات هي هياكل حويصلية خارج الخلية تفرزها الخلايا في سوائل حيوية. لالتقاط الإكسوسومات المحددة من السوائل الحيوية ، ابدأ بأخذ حبات مغناطيسية مطلية بالستربتافيدين في أنبوب.
أضف
إلى هذا الأنبوب الأجسام المضادة للإنسان البيوتينيل. البيوتين الموجود على الأجسام المضادة له تقارب كبير مع الستربتافيدين الموجود على الخرز المغناطيسي. ينتج عن هذا اقتران الأجسام المضادة مع الخرز المغناطيسي.
بعد ذلك ، أضف محلول مانع غني بالبروتين إلى الأنبوب الذي يحتوي على الخرز المغناطيسي المسمى بالأجسام المضادة. ترتبط البروتينات الموجودة في محلول الحجب بالمواقع الحرة على الخرز المغناطيسي وتزيد من خصوصية ارتباط الإكسوسوم.
الآن ، استكمل الأنبوب بعينة من السائل الحيوي الغني بالإكسوسومات. احتضان الأنبوب مع التحريض. تعرض الإكسوسومات الموجودة في السائل الحيوي مستقبلات سطحية محددة ، مما يساعدها على الارتباط بالأجسام المضادة المرتبطة بسطح الخرز المغناطيسي.
بعد ذلك ، ضع الأنبوب في مجال مغناطيسي. تحت تأثير المجال المغناطيسي ، تلتصق الخرزات المغناطيسية المرتبطة بالإكسوسوم بسطح الأنبوب. ثم ، باستخدام ماصة دقيقة ، قم بشفط السائل الحيوي المتبقي من الأنبوب.
أخيرا ، قم بإزالة الأنبوب من المجال المغناطيسي وأضف عازلة مناسبة لإزالة الخرز المرتبط بالإكسوسوم. يمكن استخدام هذه الخرزات المرتبطة بالإكسوسوم لمزيد من التحليل النهائي.
أعد تعليق محلول مخزون يحتوي على 10 ميكروغرام لكل مليلتر من الجسيمات الدقيقة المغناطيسية المطلية بالستربتافيدين ، وأضف 5 ميكرولتر من المحلول إلى أنبوب الطرد المركزي الدقيق الذي يحتوي على 495 ميكرولتر من PBS. لغسل الخرز ، أولا ، ضع الأنبوب على رف مغناطيسي لمدة 1 دقيقة وقم بإزالة المخزن المؤقت بعناية دون إزعاج الخرز.
ثم انقل الأنبوب إلى رف غير مغناطيسي. أضف 500 ميكرولتر من PBS والماصة لغسل الخرز. افعل ذلك ما مجموعه ثلاث مرات. بعد الغسيل النهائي ، قم بتعليق الخرزات في 490 ميكرولتر من PBS ثم أضف 5 ميكرولترات من الجسم المضاد للفأر المضاد للإنسان CD63 من محلول مخزون 1 ملليغرام لكل مليلتر.
امزج المحلول عن طريق سحب العينات. قم ببرمجة عينة من الدوار للدوران المتبادل عند 90 درجة لمدة 5 ثوان والاهتزاز عند 5 درجات لمدة 1 ثانية. ضع الأنابيب في الدوار وقم بتشغيل البرنامج لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
بعد ذلك ، انقل الأنابيب إلى الرف المغناطيسي لمدة 5 دقائق. اغسل الخرزات ثلاث مرات باستخدام 500 ميكرولتر من PBS ثم أعد تعليقها في 490 ميكرولتر من PBS المحتوي على الكازين. قم بتسمية أنبوب بتعريف العينة ثم أضف 10 ميكرولتر من العينة.
الماصة عدة مرات لخلط العينة مع الخرزات المترافقة بالأجسام المضادة. بعد ذلك ، قم بنقل الأنابيب إلى محور دوار العينة وقم بتشغيل نفس البرنامج لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، اغسل الخرزات ثلاث مرات باستخدام 500 ميكرولتر من 1M Tris-Hydrochloride المخزن المؤقت باستخدام الرف الممغنط. ترتبط الإكسوسومات الآن بالخرز الممغنط.