بيض الدجاج النوافذ للدراسات الإنمائية

مرحباً بكم في مختبر كرامر. أنا مات كورن، من قسم البيولوجيا العصبية والسلوك بجامعة كاليفورنيا إيرفاين. سأوضح لكم اليوم كيفية تحضير بيض الدجاج لمجموعة متنوعة من التدخلات، بما في ذلك وضع الخرز، أو حقن الأصباغ، أو الاستكشاف داخل البيضة (in ovo).

لذا ودون مزيد من التأخير، فلنبدأ. حسنًا، سنقوم الآن بتنظيف البيضة، والسبب في ذلك هو وجود الكثير من الأشياء التي قد تلتصق بها داخل الحاضنة.

سنقوم بإغلاق هذا باستخدام الشريط اللاصق. فنحن لا نريد وصول أي جزيئات صغيرة إلى المنطقة التي ستكون فيها النافذة التي سنحصل منها على البيضة، مما قد يزيد من احتمالية موت الجنين بحلول الوقت الذي نرغب فيه بإخراجه. لذا، كما رأيتم في الحاضنة، توضع البيضات بحيث يكون الجانب الكبير موجهاً للأعلى.

لذا، سنقوم الآن بأخذ البيضة وإمالتها نحو الجانب. وهذا سيحقق أمرين؛ أولاً، ستكون النافذة لدينا في هذا الموضع تماماً، وثانياً، سيطفو الجنين إلى الأعلى حتى نتمكن من إجراء أي نوع من التدخلات.

لذا سأقوم بنقل عدد قليل من البيض من الرف الذي كان في الحاضنة إلى حامل بيض كرتوني. هذه في الواقع القطعة التي تأتي في الصندوق عند تسليم البيض. لذا سنقوم اليوم باستخدامها فقط لحمل البيض.

الآن، يعود ترتيبها إليك. أنا أفضل القيام بذلك بهذه الطريقة لأنني أستطيع الوصول إلى جميع البيض في أي وقت، ولا تلمس أي منها الأخرى. ففي حال وجدت بيضة مفككة بها شرخ وسقطت، يكون هناك مساحة فاصلة بين كل منها والأخرى.

سأقوم الآن بأخذ الشاش هنا، وأسحب مجموعة جيدة بهذا الشكل ثم أقسمها إلى جزأين. سأستخدم كحول بتركيز 70% هنا، وسأقوم بملء الشاش حتى أشعر بأن الجزء السفلي قد أصبح رطباً. وذلك لأنني سأستخدم هذه المجموعة بأكملها لمسح جميع البيوض.

لذا، سأقوم فقط بإزالة بضع طبقات من الأعلى، وسأركز فعلياً على الجزء العلوي، ولكن بما يؤدي في الواقع إلى تغطية البيضة بأكملها هنا. وبعد الانتهاء من ذلك، يجف الكحول بسرعة كبيرة، وعندها يمكننا البدء في وضع الشريط اللاصق. سيلتصق الشريط بشكل جيد، وبحلول الوقت الذي أنتهي فيه من مجموعة واحدة، عادةً ما تكون البيضة الأولى قد جفت، ويمكننا الانتقال إلى الخطوة التالية في تحضير البيض.

لذا، مرة أخرى، ضع ذلك في سلة المهملات ونحن الآن مستعدون للانتقال إلى الخطوة التالية. حسنًا، الآن بعد أن تم مسح جميع البيض بالكحول، يمكننا المضي قدمًا في عمل فتحة تصريف في الجانب الكبير من البيضة، أي في قاعدة البيضة. وهذا سيسمح لنا بالدخول واستخراج بعض الألبومين، لأنه إذا لم يتم استخراج الألبومين، فلن يستقر الجنين بشكل صحيح.

لا يمكننا إجراء أي مناورات. لذا، سأقوم ببساطة باستخدام شفرة لقطع هذا الشريط البلاستيكي. إنه مرن قليلاً، وهذا أمر جيد.

لا يتيح لنا ذلك التوسع فوق الثقب إذا كان أكبر قليلاً مما نرغب فيه فحسب، بل سنحتاج أيضاً إلى تمديد هذا الجزء عندما نقوم بتغطية البيضة بأكملها. وبذلك، ستتم تغطية المنطقة التي ستكون بمثابة النافذة بالكامل. لذا، سأقوم بقطع القطعة بهذا الشكل، ومن ثم سأقوم بعمل شريط يبلغ عرضه حوالي 1 mm.

ومن ثم يمكنني من خلال ذلك صنع قطعة شريط بمساحة ملليمتر مربع تقريباً. بعد ذلك، سأقوم بوضعها مباشرة فوق التاريخ من جهة اليسار. سأضعها هناك تماماً ويمكنكم رؤيتها.

إنه يلتصق بشكل جيد جداً. بعد ذلك، يمكنني العودة إلى الشريط الذي أعددته مسبقاً، وقص قطعة أخرى من الشريط بطول مليمتر واحد. ومرة أخرى، أضعها فقط إلى يسار الرقم الموجود هناك، والذي يمثل في الواقع الجزء العلوي من البيضة.

بعد أن قمنا بتدويره جانبيًا، أصبح الآن إلى اليمين. وهناك قطعة واحدة إضافية هنا. أنا لا أرتدي القفازات الآن لأن ارتداءها سيجعل هذا الشريط يلتصق بالقفازات، وقد قمت بغسل يدي.

لست قلقاً حقاً بشأن تلوث العينة النشطة بأي شيء آخر في هذه المرحلة. لذا، سأستخدم مقصاً ذا طرف مدبب، وسأقوم بإدخاله في مركز المكان الذي وضعت فيه الشريط، ثم سأقوم بتدويره في حركة عكس اتجاه عقارب الساعة حتى ينكسر قليلاً.

وستلاحظ وجود ثقب صغير هناك. لا يشترط أن يكون الثقب كبيراً جداً، لأنه بمجرد إدخال هذه الحقنة، ستقوم بتوسيع الثقب بما يكفي. ولكن الهدف من ذلك هو تجنب الإدخال المباشر للإبرة ومحاولة كسر البيضة بها، لأن ذلك غالباً ما يؤدي إلى تكسر جانب كامل من البيضة.

وبذلك لا يمكننا استخدام البيضة بعد الآن. حسنًا، سأقوم الآن بتفريغ البيضة. لدينا هذه الفتحة الصغيرة على الجانب، وسأستخدم هذه الحقنة سعة 10 milliliter وإبرة ذات قياس كبير لاستخراج albumin.

أريد الآن حوالي ثلاثة أو أربعة ملليلترات، بالتأكيد أكثر من ثلاثة، ولكن ليس أكثر بكثير من أربعة ونصف أو خمسة. سيسمح هذا للجنين الموجود حالياً في الأعلى بالابتعاد قليلاً عن القشرة، ومن ثم سنتمكن من إجراء مناوراتنا.

لذا، ومن خلال الدخول بزاوية 45 درجة، سأكون أسفل الصفار. ومن ثم أريد تدوير الإبرة قليلاً نحو اليمين للتسلل تحتها، ويمكنك حينها الشعور بطرف الإبرة وهو يلامس قاع البيضة. وسأقوم الآن بسحب ما يقرب من ثلاثة أو أربعة، وهي تخرج بشكل جيد للغاية.

سأقوم بوضع الألبومين في وعاء النفايات هنا، والآن يمكنني المتابعة مع البيض الآخر. حسناً، سأواصل العمل. وستلاحظون هنا أن الثقب الذي أحدثته للتصريف أكبر قليلاً مما أريد، ولكن هذا لا يشكل مشكلة.

ما أريد الحذر منه هو ألا أتسبب في كسر البيضة أكثر أثناء إدخال الإبرة. لذا، سأشرع في القيام بذلك. حسناً، يمكنني أن أرى بالفعل وجود شرخ بسيط في البيضة.

تعتبر الشقوق الصغيرة مقبولة، ولكن يجب القلق عندما تمتد إلى مستوى آخر من البيضة. وفي هذه الحالة، حدث ذلك بالفعل، ويمكنك رؤية ذلك من خلال الثقب.

إنها تمتد تقريبًا إلى الأعلى. وفي الواقع، هذا هو المكان الذي ستوضع فيه نافذتنا. لذا، لسوء الحظ بالنسبة لهذه البيضة، سيتعين علينا التخلص منها.

ولا يوجد شيء خاص بشأن التخلص منه؛ فلا حاجة إلى كتابة بروتوكول محدد أو ما شابه. سأقوم ببساطة بوضعه في وعاء النفايات.

نستخدم صناديق النفايات السوداء هذه لتمييزها على أنها نفايات حيوانية، ولكن بخلاف ذلك، فقد تم التعامل مع الأمر بالفعل. يمكننا الآن الانتقال إلى البيضة التالية. حسنًا، الآن بعد أن قمنا بتصريف جميع البيوض، يمكننا المضي قدمًا وتغطية فتحة التصريف.

هذا الأمر مهم لأنه إذا لم نقم بذلك داخل الحاضنة، فقد يحدث تبخر هائل لما تبقى من الألبومين. والبيضة الجافة هي بيضة ميتة. لذا، سنقوم باستخدام قطعة شريط لاصق من الحجم نفسه تقريبًا ونضعها فوق الثقب، وبذلك لن نضطر للقلق بشأن الدخول من هذا الثقب مرة أخرى.

في بعض الحالات، إذا قررت أنك ترغب في محاولة سحب المزيد من الألبومين من البيضة بعد فتحها، فإن هذه الفتحة تعمل كمنطقة محكمة الإغلاق تقريبًا، حيث يمكنك إدخال إبرة من خلالها دون فقدان كمية كبيرة من الألبومين. حسنًا، هل هي كذلك؟ حسنًا، سنقوم الآن بتغطية البيض بقطعة شريط لاصق ذات حجم مناسب.

ويمكنني تشبيه ذلك بوضع قطعة من الشريط اللاصق فوق بالون قبل غرز دبوس صغير فيه؛ فالأمر الرائع هو أن البالون لا ينفجر، وفي هذه الحالة نضع شريطاً لاصقاً صغيراً فوق البيضة. وبذلك لا تتشقق البيضة في أماكن متعددة، ومن ثم يمكن سد النافذة، وعندما تُغلق النافذة، وبفضل استخدامنا للشريط اللاصق، يتكون نوع من الختم المحكم، وبالتالي لا نحتاج للقلق بشأن أي تبخر.

يمكنكم ملاحظة حجم الشريط، فهو على الأرجح أكبر قطعة قصصتها حتى الآن، ومع ذلك سأقوم بمطه قليلاً وأشده جيداً، مع تطبيق قدر بسيط من الشد ووضعه فوق البيضة. سألتف حول الجزء الخلفي هنا وأمطه بحذر شديد فوق البيضة لضمان عدم وجود أي ثنيات في الموضع الذي ستكون فيه النافذة. ويمكنكم إعادة ضبط وضعية الشريط قليلاً.

إنها لا تلتصق لدرجة تجعلك تقلق؛ فبمجرد أن تلتصق، فإنها تبقى ثابتة. ويمكنك أن ترى أن هذه المنطقة العامة هنا هي المكان الذي سأقوم فيه بقص النافذة.

حسناً، الآن بعد أن وضعنا الشريط اللاصق على جميع البيضات، يمكننا المضي قدماً في فتح نافذة من الأعلى. قد يكون هذا الجزء هو الأكثر صعوبة، وغالباً ما يكون هو المرحلة التي تفقد فيها أغلب البيضات. لذا، سأقوم بمسح المقص جيداً بقطعة شاش مبللة بالكحول، ثم سأقوم بتجفيفه.

يجف الكحول تقريباً من تلقاء نفسه، ولكن لا يُراد للكحول أن يتسرب مباشرة إلى داخل البيضة. لذا سأقوم بالبدء من منتصف منطقة الشريط اللاصق، وأكرر حركة التدوير باتجاه وعكس اتجاه عقارب الساعة حتى أسمع صوت تصدع بسيط، وعندها سأعلم أن الشفرة قد نفذت إلى الداخل.

ثم أرغب في تحريك المقص للخارج بحيث يكون شبه مسطح مقابل سطح البيضة. بعد ذلك، أقوم بعمل قصات صغيرة حتى أتمكن من إدخال شفرتي المقص بالكامل. سأعود من الاتجاه الآخر بمجرد أن أكون قد قصصت ما يشبه نصف دائرة؛ ولا أريد إكمال الدائرة لأنني أريد ترك نافذة، ومن ثم يمكنني ببساطة المضي قدماً في فتح البيضة.

وفي الوقت الحالي، يبدو أن أعمارها تقارب ما توقعته، ولا يوجد بها الكثير من الأوعية الدموية، ولكن هناك القليل من الدم حول موقع الجنين، وبشكل أساسي من منطقة delion حيث بدأ الدم بالتجمع الآن وتوقف نبض القلب. لذا سأقوم بإغلاق ذلك، وسأتركه يستقر في الأعلى بهذا الشكل، ثم أعود مرة أخرى وسأقوم بإغلاق النوافذ. ومرة أخرى، فقط بشكل مسطح على السطح وبالاتجاه المعاكس.

حسنًا، لقد ظهرت لدينا فقاعتان هنا، وتبين أن الجنين موجود في الجانب. والآن، هناك أمران يمكننا القيام بهما في هذه اللحظة؛ فإذا كان لدينا عدد كافٍ من البويضات ولا نشعر بالقلق حيال استخدام كل واحدة منها، يمكننا ببساطة التخلص من هذه.

أو يمكننا إغلاق النافذة وضبطها بحيث يطفو الجنين تدريجياً إلى الأعلى حيث نريده مجدداً. وعندما نصل إلى مرحلة التعامل معه، قد يكون في الموضع المطلوب؛ وإذا لم يكن كذلك، يمكننا التخلص منه في ذلك الوقت.

لقد قمت هنا بوضعه بزاوية مائلة. سيحدث تدفق بسيط للألبومين، ولكن هذا سيساعد الجنين على العودة إلى موضعه المطلوب. حسناً، الآن وبعد أن انتهينا من جميع هذه النوافذ، يجب أن نتأكد من إغلاقها، ونريد إغلاقها قبل إجراء أي عمليات تلاعب.

وبعد ذلك، يمكننا المضي قدماً وإعادة إغلاق البيضة. ولكن إذا كانت هناك فتحة، فقد ينزلق الصفار أحياناً. فإذا مالت البيضة قليلاً أثناء انتقالك من غرفة إلى أخرى، فإنك لن ترغب في سقوط المحتوى بالكامل.

كل ما أفعله هو قص قطعة أخرى من الشريط البلاستيكي بعرض 1 مم، أو عذراً، بعرض 1 مم، ربما بطول 2 أو 3 مم. وأفضل وضعها هناك في المنتصف تماماً. وإذا استطعت سحبها للأسفل أمام البيضة، فإن ذلك يجعلها مشدودة.

ويمكنكم رؤية موضع النافذة، حيث كان الشريط الآخر، حيث قمنا بقص النافذة مما جعلها محكمة الإغلاق إلى حد كبير في الوقت الحالي. أعني أننا سنقوم بإجراء بعض المعالجات بعد دقيقة واحدة، لذا ليس من الضروري أن تكون محكمة الإغلاق تماماً. هكذا يتم تحضير البيض وعمل نافذة فيه.

بالتوفيق في تجاربكم.