الاسفنجة كحول البولي فينيل نموذج زرع

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام إسفنجة من كحول البولي فينيل لنمذجة التئام الجروح في الفئران. ويتم تحقيق ذلك من خلال ترطيب الإسفنجة وتحميلها أولاً من أجل الزرع. بعد ذلك، يتم إدخال الإسفنجة في جيب بين العضلات البطنية وجلد الفأر.

بعد عملية الزرع، يمكن حقن كل إسفنجة بالعلاج. وتتمثل الخطوة النهائية في إزالة الإسفنجات من الفأر. وفي النهاية، يمكن إجراء عملية التقطيع والتلوين والمقايسات الكمية لمراقبة التغيرات والتباينات في عملية التئام الجروح.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر رؤى حول التئام الجروح، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضاً في مجالات دراسية أخرى مثل تكوين الأوعية الدموية في الأورام، وإيصال الأدوية، وبقاء الخلايا المزروعة والاندماج النسيجي. ابدأ بترطيب الإسفنج عن طريق التحريك طوال الليل في محلول كلوريد الصوديوم المائي بتركيز 0.9%. ثم قم بتعقيم 75 milliliters من معلق الإسفنج المرطب بجهاز الأوتوكلاف لمدة 25 دقيقة عند 121 °C.

لتعقيم الإسفنج، ضع محلول الإسفنج الخاص بالموصدة (autoclave) داخل غطاء معقم، ثم استخدم ملقطاً معقماً لالتقاط إسفنجة واحدة، واضغط على الإسفنجة باستخدام الملقط، واستخدم رأس شفاط (vacuum tip) لإزالة أكبر قدر ممكن من المحلول من الإسفنجة. الآن، ضع الإسفنجة المعصورة في طبق زراعة أنسجة، مع الحرص على ترك مسافة بين الإسفنجات، ثم انقل محلول المعالجة بواسطة الماصة مباشرة إلى مركز الإسفنجة. بعد ذلك، اضغط برفق على الإسفنجة باستخدام رأس الماصة للمساعدة في امتصاص الإسفنجة للمحلول.

بمجرد تحميل جميع الإسفنجات، تُحفظ اللوحة على الثلج حتى يتم زرع الإسفنجات في الفأر. بعد التأكد من التخدير باستخدام اختبار منعكس القرص، ابدأ بوضع الفأر في مخروط أنفي في وضع الاستلقاء الظهري. ثم باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية، قم بإزالة الشعر من منطقة بمساحة بوصة واحدة في بوصة واحدة على الجانب البطني السفلي للفأر أسفل القفص الصدري.

مسح المنطقة لتنظيفها من الشعر المقصوص بعد ذلك. تعقيم المنطقة المحلوقة باستخدام Betadine، يليه الكحول بتركيز 70%. بعد ذلك، يتم شد الجلد جيداً.

استخدم المشرط لإجراء شق عمودي، يكون طوله مرة ونصف إلى مرتين من قطر الإسفنج المراد إدخاله. مع الحرص على عدم القطع وصولاً إلى تجويف الجسم. استخدم الملقط للإمساك بحافة الجلد.

ثم استخدم مقص ميتزنباوم لفصل الجلد ببطء عن العضلات على جانبي الشق. قم بتوسيع الجيب على عرض الفأر ومن القفص الصدري وصولاً إلى الأرجل الخلفية. الآن، استخدم الملاقط لالتقاط الإسفنجة الأولى التي سيتم وضعها في الحيوان عن طريق الإمساك بها من الجوانب.

بعد ذلك، انقل الإسفنجة إلى ملقط مستقيم بحيث يتم إمساكها من الأعلى والأسفل. ثم، أمسك طرف الجلد وارفعها باستخدام ملقط آخر، وأدخل الإسفنجة ببطء، مع تجنب لمس الجلد أو العضلة الموجودة تحته. وبمجرد إدخال جميع الإسفنجات، استخدم ملقطاً لإمساك جانبي الشق معاً، ثم مرر خيط الجراحة عبر طبقتي الجلد.

أحكم ربط العقدة الأولى بما يكفي لإغلاق حواف الجلد، وأكمل العقدة المربعة برمية واحدة إضافية من الاتجاه المعاكس، مع شد العقدة بإحكام هذه المرة. ثم اربط عقدتين مربعتين إضافيتين لإنهاء الغرزة.

ضع غرزاً إضافية لإغلاق الشق الجراحي بالكامل. وأخيراً، أخرج الحيوان من جهاز التخدير وراقبه حتى يستعيد وعيه. يجب أن يبدأ الفأر في الحركة سريعاً والعودة إلى مستوى قدرته على التنقل كما كان قبل العملية.

ابدأ بملء محقنة بالمحلول المطلوب وثبت إبرة قياس 28 gauge في المحقنة. بعد ذلك، وبعد التأكد من التخدير عن طريق قرص إصبع القدم، اغرس الإبرة في الحيوان بزاوية 45 درجة عبر الجلد في منتصف الإسفنج للتأكد من وجود الإبرة داخل الإسفنج. ثم ارفع الإبرة ببطء وبشكل عمودي.

إذا كانت الإبرة داخل الإسفنجة، فسترتفع الإسفنجة مع الإبرة. بعد ذلك، قم بحقن المادة ببطء داخل الإسفنجة ثم اسحب الإبرة. بعد تضحية الحيوان، أمسك الجلد بملقط وأجرِ شقاً جراحياً بالقرب من الإسفنجة المطلوبة.

أخيرًا، افصل الإسفنجيات بعناية عن الكبسولة المحيطة بها، مع تجنب جمع أنسجة إضافية تحيط بالإسفنجية التي تمت إزالتها. يمكن تخزين الإسفنجيات تحت ظروف مختلفة اعتمادًا على نوع التحليل الذي سيتم إجراؤه. ومن أجل التقطيع، يمكن تضمين الإسفنجيات المسترجعة في وسط تجميد، مثل مركب درجة حرارة القطع المثالية، أو وضعها في 10% formalin للتضمين والتقطيع في قوالب البارافين، كما تم القيام به لهذه الإسفنجيات المصبوغة بـ h and e.

وفي هذه المقاطع من الإسفنج المصبوغ بـ trireme، يتم الحصول على أفضل نتائج التقطيع عندما يتم قطع الإسفنج إلى نصفين عبر القطر كما هو موضح هنا، ثم يتم تضمينه بحيث يكون السطح المقطوع لأسفل. وكما هو موضح هنا، يجب أخذ مقاطع من الإسفنج بحيث يظهر العرض الكامل للإسفنج في هذا الشكل. لقد تم تضمين أو تقطيع الإسفنج الموجود على اليسار بشكل غير صحيح، كما يتضح من حدود النسيج الممزقة على الجانب الأيمن من المقطع، بينما تمت معالجة الإسفنج السليم الموجود على اليمين بشكل صحيح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، سيكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير إسفنجات كحول البولي فينيل وزرعها وحقنها وإزالتها لدراسة التئام الجروح في الفئران.