الدهون طبقة ثنائية الحويصلة انشاء طريق ميكروفلويديك النفث

الهدف العام من هذا الإجراء هو توليد حويصلات ثنائية الطبقة الفوسفوليبيد مع زيادة التحكم في الغشاء ، والانلا ، والمولية ، والتشتت الأحادي ، والمحتويات الداخلية. باستخدام cad ، يتم تصنيع الغرفة من صفائح الأكريليك والمطاط الطبيعي. يتم إنتاج طبقة ثنائية دهنية معلقة عن طريق تحميل الغرفة بالدهون والمحلول.

بعد ذلك ، يتم إعداد نفث الحبر الذي يحتوي على المحلول المراد تغليفه مع جهاز النفث. بمجرد تحديد الإعدادات المناسبة ، ستنتج نبضات السوائل النفاثة حويصلات ثنائية الطبقة دهنية. في النهاية ، ينتج عن النفث الموائع الدقيقة حويصلات ثنائية الطبقة أحادية مشتتة قابلة للتكرار.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل التكوين الكهربائي أو المستحلب أو توليد القطرات ، هي زيادة مستوى التحكم في الغشاء ، والمولية أحادية الجانب ، والتشتت الأحادي ، والمحتويات الداخلية. وسيتم توضيح الإجراء جوانا هارو, طالبة دراسات عليا من مختبر ومساعدة كارا باتيل, طالب جامعي باستخدام برنامج CAD, رسم شكل للغرفة التي يمكن تصنيعها من الأكريليك باستخدام الحفر الأول قاطع الليزر, واحد 16 بوصة من خلال الثقوب على جانبي غرفة الأكريليك المجمعة. سوف يستنزف ذلك إلى شكل ما لا نهاية بشكل جيد.

ثانيا ، قم بقص مستطيل صغير بمقص من لوح أكريليك 0.2 ملم ليكون بمثابة الجزء السفلي من شكل اللانهاية. قم بتثبيته جيدا في مكانه باستخدام مادة لاصقة سريعة الجفاف ، مع التأكد من عدم الحصول على غراء في مناطق المشاهدة. يجب مسح لوح الأكريليك على جدار الغرفة وتثبيته في قاع الغرفة.

ثالثا ، استخدم مادة لاصقة سريعة الجفاف للصق قطعة رقيقة من لوح المطاط الطبيعي فوق الثقوب المحفورة. اضغط عليها في مكانها بالملاقط. اختبر جميع اللحامات الملصقة بحثا عن التسريبات.

لا ينبغي أن يكون هناك أي شيء. أخيرا ، باستخدام إبرة قياس 23 ، قم بعمل ثقوب في المطاط من خلال الثقوب المحفورة ، سيتم إدخال طرف نفث الحبر الكهروإجهادي من خلال هذه الثقوب. يجب إذابة الدهون الفوسفورية في الكلوروفورم وتخزينها عند 20 درجة مئوية تحت الصفر.

D-P-H-P-C أو DOPC. تستخدم الدهون في هذا العرض التوضيحي. يتم نقل الدهون المذابة في الكلوروفورم إلى قارورة زجاجية أثناء إمساك القارورة بزاوية ، وتجفيف الدهون برفق تحت غاز الأرجون أو النيتروجين.

ثم ضع القارورة مع غطاءها فضفاضا قليلا تحت الفراغ لمدة ساعة إلى ساعتين لإزالة المذيب المتبقي. يمكن أيضا استخدام المجفف لهذه الخطوة. الآن قم بإذابة الدهون في نهاية التزيين للحصول على تركيز دهني نهائي يبلغ 25 ملليغرام لكل ملليلتر.

دوامة الحل. أغلق الغطاء لفترة وجيزة باستخدام البارام ثم صوتي لمدة 15 دقيقة. قم بتخزين هذا المحلول عند درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر.

بعد ذلك ، قم بإعداد محلول السكروز مع الأسمولية الفسيولوجية مثل الأسمولية. هذا هو حل النفث. ضع في اعتبارك إضافة قطرة من صبغة الطعام الداكنة أو حبات الفلورسنت إلى المحلول لمزيد من التباين أو الفلورة.

قم بتحميل محلول السكروز في حقنة سعة مليلتر واحد لإزالة الهواء المحبوس. قم بنقر المحقنة حتى ترتفع أي فقاعات إلى فتحة الإغراء ويمكن طردها. بعد ذلك ، قم بتوصيل مرشح 33 ملم 0.22 ميكرون بالمحقنة وادفع قطرة واحدة للخارج عبر الفلتر.

الآن قم بفك محول الإغراء الأنثوي لنفث الحبر واضغط عليه في نهاية الفلتر. ادفع بعض السوائل للخارج لإزالة أي هواء محاصر. أخيرا ، قم بتوصيل المحقنة بالجزء العلوي من سائل نفث الحبر.

يجب أن تنتقل إلى طرف نفث الحبر إذا تم توصيل المحقنة بشكل صحيح. أولا ، قم بتركيب مجموعة المحقنة على مرحلة المجهر وقم بتوصيل وحدة التحكم النافثة للحبر لهذه التجربة. تحتاج المسرح والحقنة إلى تحكم مستقل مع تحرك كل من المسرح والحقنة في ثلاثة أبعاد للتصور.

قم بإعداد كاميرا عالية السرعة قادرة على 1000 إطار في الثانية على الأقل. قم بتعيينه لاستخدام التشغيل التلقائي المستند إلى الصور لبدء التسجيلات. الآن ، قم بتأمين الغرفة على المسرح بشريط لاصق وقم بمحاذاة طرف نفث الحبر بعناية مع الفتحة المصنوعة في الصفيحة المطاطية على جانب الغرفة.

أولا ، اضبطها بالعين ثم قم بإجراء تعديلات دقيقة باستخدام المجهر. بمجرد محاذاة المحقنة ، قم بإعادة المحقنة على طول بعد واحد لتحميل شكل اللانهاية. حسنا ، ثم قم بالضغط برفق على المكبس ، بحيث تتشكل قطرة على الفوهة.

هذا يوفر بعض الضغط الخلفي الأولي. يجب ضبط معلمات النفث. يتم تقديم القيم المحددة التالية للموجة ثنائية القطب شبه المنحرفة على الجهد المطبق على الشاشة وعدد النبضات النفاثة لكل حجم حويصلة التحكم في الزناد.

الآن قم بتحميل الغرفة ب 25 إلى 30 ميكرولترا من محلول الدهون في نهاية العقد ، مما يغطي السطح الكامل على شكل ما لا نهاية. حسنا ، أضف 25 ميكرولترا من محلول الجلوكوز إلى الحافة الخارجية التي يتم ماصتها ببطء وسلاسة ، ويجب ألا يختلط الجلوكوز في محلول الدهون. في غضون 10 دقائق ، ستتشكل طبقة ثنائية دهنية في وسط الغرفة.

يعد إعداد الطبقة الثنائية الخطوة الأكثر أهمية لأن الطبقة الثنائية غير مستقرة ويمكن أن تنكسر حسب التحضير. اصطبر. سوف ينجح بمجرد التدرب على ملء الغرفة عدة مرات.

الآن ، أدخل طرف نفث الحبر بعناية مرة أخرى في الغرفة عندما يكون الطرف في حدود 200 ميكرون من واجهة القطرة. ثنائي الطبقة ، ابدأ عملية النفث وسجل البيانات باستخدام نفث الحبر الذي قدم نظرة ثاقبة لعملية إنشاء الحويصلة. على سبيل المثال ، أثر تغيير المسافة بين فوهة نفث الحبر والطبقة الدهنية الثنائية على القوة التي تشوه الغشاء. غلق.

ركز القرب من الطبقة الثنائية التيار النفاث ومنع الغشاء من تشتيت الطاقة بعيدا عن نقطة توليد الحويصلة. أيضا ، زاد انتقال الدوامة مع الجهد المطبق على المشغل الكهربائي بيزو. تم تصور تكوين الحويصلة كسلسلة من الأحداث بعد تكوينها.

يميل استقرار الحويصلة إلى الاختلاف باختلاف قطر الحويصلة ، حيث تكون الحويصلات الأصغر أكثر استقرارا. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية توليد حويصلات منتهكة للدهون باستخدام نفث الموائع الدقيقة.