بالقرب الأشعة تحت الحمراء (نير) ضوء يزيد من التعبير عن علامة من الميتوكوندريا وظيفة في ماوس الدهليزي الحسية الظهارة

الهدف العام من التجربة التالية هو التحقيق في التأثير الوقائي العصبي المحتمل لضوء الأشعة تحت الحمراء القريبة على ظهارة الفأر الحسية الدهليزية. يتم تحقيق ذلك من خلال تطبيق بسيط قصير المدى عبر الجمجمة لضوء الأشعة تحت الحمراء القريبة على الفئران في مراحل نمو مختلفة. كخطوة ثانية ، يتم تشريح المتاهات العظمية للحيوانات المعالجة ، مما يسمح بعزل الظهارة الحسية الدهليزية.

بعد ذلك ، يتم قياس التعبير عن الجين المضاد للأكسدة المعني بواسطة R-T-P-C-R لتقييم تأثير العلاج على أداء الميتوكوندريا. أخيرا ، يتم إجراء قياس الكثافة لتقييم تأثير العلاج القصير بالأشعة تحت الحمراء القريبة على التعبير عن جينات معينة مضادة للأكسدة في الفئران. الميزة الرئيسية لتقنية العلاج بالأشعة تحت الحمراء القريبة هي أنها بسيطة وغير جراحية ، مما يسمح بمزيد من التحليل الفسيولوجي والجزيئي والسلوكي بعد العلاج.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو الحماية العصبية المحتملة للجهاز الدهليزي المحيطي أثناء الشيخوخة الطبيعية ، أو إلى تحسين الأداء المتوازن بعد المرض الدهليزي أو العجز. قبل يومين إلى ثلاثة أيام من بدء التجربة ، احلق الفراء على مناطق الرأس والرقبة لكل فأر قدر الإمكان لمنع إعادة نمو شعر قبل الانتهاء من نظام العلاج. للحفاظ على حالة الخالية من مسببات الأمراض ، قم بتنظيف الأدوات بنسبة 70٪ من الإيثانول بين كل حلاقة.

ثم في يوم العلاج لكل متدرب حيواني ، التقط الفأر في الطرف القريب من الذيل واتركه يسترخي في راحة يد واحدة لتقليل الضغط على المعالجة بالأشعة تحت الحمراء القريبة. لكل ، أمسك جهاز LED بحجم 670 نانومتر ، على بعد سنتيمتر إلى سنتيمترين من المنطقة المحلوقة ، وقم بتشغيل الجهاز لمدة 90 ثانية. بالنسبة للمجموعة الوهمية ، كرر إجراء العلاج بنفس الطريقة ، ولكن مع إيقاف تشغيل الجهاز للمجموعة المحظورة بالأشعة تحت الحمراء القريبة ، تعامل مع بنفس طريقة المجموعة المعالجة بالأشعة تحت الحمراء القريبة ، ولكن مع الجهاز المغطى بورق الألمنيوم.

بعد تكرار العلاجات لكل مجموعة على فترات 24 ساعة لمدة خمسة أيام متتالية ، قم بتجميد السائل النخاعي الدماغي الاصطناعي الطازج القائم على الجلسرين ، أو السائل الدماغي النخاعي في فريزر 80 درجة مئوية تحت الصفر لمدة 45 دقيقة حتى يتشكل ملاط ثلج. مقبل. لكل فأر ، استخدم شفرة حلاقة مستديرة رقم 22 لعمل شق على طول الجلد السهمي للجمجمة ، مما يحافظ على برودة دماغ قبو القحف والجهاز الدهليزي الأساسي قدر الإمكان مع التطبيقات المنتظمة للنخاذ النخاعي البارد على الأنسجة. ثم استخدم الذراع المدببة لزوج من المقصات ذات النمط القياسي لعمل شق صغير في الجمجمة في Lambda وقصها على طول الخيط السهمي.

ثم حرك ذراعا واحدة من URS الضحل برفق أسفل العظم الجداري ، ثم قم بتأمين وسحب العظم الجداري بشكل جانبي والعظم القذالي للخلف حتى يتعرض الدماغ. ثم استخدم ملعقة صغيرة من الفولاذ المقاوم للصدأ لرفع الدماغ بعيدا عن الحفرة القحفية الأمامية والوسطى. لفضح العصب القوقعي الدهليزي ، قم بتمرير العصب لمنع التوتر غير الضروري على المحاور الواردة الأولية التي تغذي خلايا الشعر الدهليزي مباشرة.

ثم قم بإزالة الدماغ في كل وجه ولاحظ المتاهة العظمية التي تحتوي على القوقعة والأعضاء الدهليزية الطرفية في الحفرة القحفية الوسطى. الآن قم بعمل شقين صغيرين بجانب كل متاهة عظمية وأمسك القناة الأمامية شبه الدائرية واسحبها بشكل جانبي لاستئصال الهيكل بأكمله. ثم اغمر المتاهة المقطوعة على الفور في طبق تشريح يحتوي على محلول السائل الدماغي النخاعي المثلج البارد أثناء الترشيح المستمر للكربوجين.

أصعب جزء في هذا الإجراء هو الحصول على كميات ثابتة من الأنسجة القابلة للحياة لكل نوصي بممارسة المراقبة الدقيقة والإضاءة المحددة للأنسجة. بعد ذلك ، تحت مجهر ستيريو ، اضغط باستمرار على المتاهة بجوار القوقعة واستخدم الملقط لتثبيت الأنسجة في قاع الطبق باستخدام ملقط دقيق مستقيم. خدش فتحة صغيرة في العظم فوق القناة الأمامية شبه الدائرية.

ثم قم بالوصول مباشرة إلى أسفل العظم ونفض الغبار للخارج بعيدا عن ULA لتكبير الفتحة برفق. استمر بهذه الطريقة حتى يتم الكشف عن اللقط الأمامي والجانبي. ثم استخدم ملقطا دقيقا لرفع الرحم واللب برفق بعيدا عن المتاهة العظمية حتى يتم فصلهما تماما.

أخيرا ، أمسك الأعضاء الدهليزية بإحكام بين طرف الملقط وضعها في تحلل طازج. قم بتخزين الملقط في أنبوب صغير علوي لولبي ، وقم بتدوير الملقط برفق في المخزن المؤقت لفصل الأعضاء الدهليزية. ثم بعد التأكد من خلو الملقط من الأنسجة تحت المجهر الاستريو ، قم بربط غطاء الأنبوب الدقيق وقم بتجميد العينة على الفور في النيتروجين السائل لمقارنة تأثير العلاج بالأشعة تحت الحمراء القريبة بين الفئران الصغيرة والأكبر سنا.

رسول ، تم عكس الحمض النووي الريبي إلى الحمض النووي التكميلي ، ثم تم تحليل التعبير عن أكسيد الفائق المضاد للأكسدة ديسموتاز واحد أو SOD واحد كما تم قياسه بواسطة قياس الكثافة ، ولوحظ زيادة كبيرة في بيتا أكتين طبيعي أحمق واحد من أكثر من ضعفين في الصغيرة المعالجة بالأشعة تحت الحمراء القريبة مقارنة بالحيوانات الصغيرة المعالجة الوهمية الصغيرة المحظورة بالأشعة تحت الحمراء القريبة. أظهرت القديمة المعالجة بالأشعة تحت الحمراء أيضا أكثر من ضعف تنظيم العشب عند مقارنتها بالحيوانات القديمة المحظورة بالأشعة تحت الحمراء. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء تجارب سلوكية أو جزيئية أو فسيولوجية للإجابة على أسئلة إضافية مثل ، هل يزيد ضوء الأشعة تحت الحمراء القريبة من التعبير الجيني أو البروتيني الآخر في الظهارة الحسية الدهليزية؟

أم أن ضوء الأشعة تحت الحمراء القريبة يحسن أداء التوازن العام للفئران المعالجة؟