بقعة الأنسجة الصحيحة في كل مرة في كتل متعددة النسيج

الهدف العام من هذا الإجراء هو بناء أداة للمساعدة في تحديد الأنسجة في كتل البارافين متعددة الأنسجة. يتم تحقيق ذلك عن طريق الجمع بين HistoGel أولا وصبغة تمييز الأنسجة لتشكيل سدادة جل ذات ألوان زاهية. تتمثل الخطوة الثانية في معالجة وتضمين سدادات HistoGel الملونة باتباع تقنيات معالجة الأنسجة القياسية وتضمينها.

بعد ذلك ، يتم استخدام لكمة الخزعة لإزالة الأسطوانات الصغيرة. هذه هي علامات اتجاه العينة أو البقعة. تتمثل الخطوة الأخيرة في تضمين البقعة في كتلة متعددة الأنسجة مع موقع البقعة وكل عينة موثقة بعناية لسهولة الرجوع إليها.

في النهاية ، توفر البقعة إشارة بصرية واضحة لتوجيه العينة وتحديدها في المصفوفات الدقيقة للأنسجة وكتل الأنسجة المتعددة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل الغرز أو النوى غير المتماثلة ، هي أن البقعة لا تغير الأنسجة وتسمح بالمرونة في ترتيب العينات من أجل التحليل الأمثل. خطرت لنا فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما تلقينا طلبات من المحققين لدمج عينات الأنسجة من متعددة في كتلة بارافين واحدة لتوفير المال وتبسيط التحليل لتحضير البقع ، ابدأ بإضافة 50 ملليغرام من الدرجة الكيميائية الحيوية BSA إلى مليلتر واحد من صبغة تمييز الأنسجة في أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلترا.

دوامة الخليط لمدة دقيقة واحدة على الأقل حتى يذوب تماما. بعد ذلك ، قم بتحميل تسعة ملليلتر من هلام معالجة هيدروكسي إيثيل أروس في أنبوب مخروطي سعة 15 مليلتر وقم بتسخينه في ميكروويف بقوة 30٪. اخفقي الحرارة بزيادات عشر ثوان حتى يذوب الجل تماما.

الآن امزج جل المعالجة المنصهر ومحلول BSA الصبغي في أنبوب مخروطي واحد سعة 15 مليلتر واخلطه جيدا باستخدام ماصة. ثم قم بتدوير المحلول وانقله إلى الثلاجة لبضع ساعات حتى يتصلب. بمجرد أن تصلب ، قم بإزالة التوسيع الصلب في الجل عن طريق تحريره برفق باستخدام ملعقة ضيقة.

قم بتقطيع القابس إلى أقسام بسمك خمسة ملليمترات. لا تستخدم الأطراف المستديرة. انقل ثلاثة إلى ستة أقسام إلى كاسيت الأنسجة واغمرها في 70٪ من الإيثانول ، وقم بتغيير محلول الإيثانول بنسبة 70٪ كل ساعتين إلى أربع ساعات ، وثلاث مرات على الأقل على مدار 24 ساعة حتى تجف المقابس تماما.

سوف يرشحون بعض صبغة الوسم في محلول الإيثانول. يساعد استخدام تغييرات الإيثانول الطازج في البداية على طرد بعض الصبغة الزائدة مما ينتج عنه سدادة أنظف أقل عرضة لترشيح اللون. بعد ذلك ، انقل الكاسيت إلى 80٪ إيثانول ثم إلى 95٪ من الإيثانول لمدة ساعة واحدة في كل حمام.

قد تتسرب الصبغة من سدادة الهلام، مما قد يؤثر على الأنسجة الأخرى والكواشف السائلة في معالج الأنسجة الآلي. على هذا النحو ، يوصى بشدة بالجفاف اليدوي. ومع ذلك ، فإن المعالجة الآلية فعالة بنفس القدر.

أكمل الجفاف بثلاث غسلات في 100٪ من الإيثانول لمدة ساعة لكل منها. امسح العينات عن طريق الغمر في الهيدروكربونات الاتيكية أو الزيلين ثلاث مرات لمدة ساعة واحدة في كل حمام. الآن تسلل إلى الأقسام بثلاثة حمامات لمدة ساعة واحدة.

في البارافين المنصهر. قم بتضمين الأقسام المعالجة كالمعتاد ، وعندما تكون الكتلة في درجة حرارة الغرفة ، استخدم إبرة ثقب جلدية لعمل نوى موضعية. يمكن للكتلة الواحدة أن تصنع نوى 22 ملم أو حتى أكثر من 1.5 ملليمتر.

ابدأ بعمل رسم تخطيطي للإشارة إلى المواقع والهويات المطلوبة لجميع قطع الأنسجة الفردية المراد تضمينها معا وموقع البقعة. قم بإعداد نسخة للاحتفاظ بها في متناول اليد. يتطلب الاستخدام الناجح لعلامات توجيه العينة خريطة عينة حيوية واضحة وسهلة المتابعة توضح بدقة جميع العينات الحيوية وموقعها وموقعها بالنسبة للبقعة.

بعد معالجة قطع المناديل ، رتبها على محطة التضمين. وفقا لمخطط اتجاه الأنسجة ، فإن الاتجاه الصحيح أمر بالغ الأهمية. من الضروري أيضا أن يكون لب البقعة أطول من جميع قطع الأنسجة التي سيتم تضمينها في الكتلة.

بعد الانتهاء من ترتيب الأنسجة ، قم بتضمين البقع. امسك كل بقعة في وضع مستقيم بالملقط حتى يتجمد البارافين حتى لا يسقط. يجب أن تكفي دقيقة أو دقيقتين.

للحصول على مجموعة TMA اليدوية ، املأ قالب TMA بالبارافين المذاب. عندما يبرد القالب ، قم بإرفاق البقع بطريقة مماثلة عند هوامش المصفوفة. الآن قسم وصمة عار الأقسام مع البقعة.

باستخدام نهج قياسي ، يتم عمل خمسة أقسام ميكرون هنا. لوضع الأقسام على الشرائح ، قم بتعويمها في حمام مائي 40 درجة مئوية ، ثم انقلها إلى شرائح زجاجية موجبة الشحنة. بمجرد ربطها بالشرائح ، جففها على حرارة 60 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة على الأقل.

يمكن الآن تلطيخ الشرائح يدويا أو على نظام تلطيخ آلي. بالنسبة للتلطيخ الروتيني h و d ، ظهرت بقع خاصة أو بقع كيمياء مناعية على شكل دائري بألوان زاهية. في كتلة البارافين وفي جميع أقسام البارافين.

سمحت البقع بسهولة التوجيه وتحديد الأنسجة في كتل الأنسجة المتعددة التي تحتوي على أنسجة متشابهة من أفراد ومجموعات علاج مختلفة. عند استخدامها في الأنسجة ، سمحت بقع المصفوفات الدقيقة باستخدام كل نواة لعينات الأنسجة القيمة ويمكن بسهولة اختيار البقع بجوار نواة المصفوفة الدقيقة للأنسجة. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن التوثيق الدقيق والواضح للعينة الحيوية والبقعة الموجودة في الكتلة أمر بالغ الأهمية لاستخدامها بنجاح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء واستخدام علامة توجيه العينة بسهولة كوسيلة مساعدة في تحديد الأنسجة في كتل البارافين متعددة الأنسجة.