إعداد وتوصيف الفردية والمتعددة المخدرات تحميل جسديا شرك البوليمرية المذيلات

الهدف العام من التجربة التالية هو تحديد عملية خطوة بخطوة لإعداد وتوصيف الدواء المحمل بخلاياي قبل تقييمها في حالات المرض ذات الأهمية. يتم تحقيق ذلك من خلال إعداد خلاياي بطريقة صب المذيبات لتوليد خلاياي القابلة للتكرار للدراسة. كخطوة ثانية ، يتم تقييم استقرار تحميل الخلية وحجمها ، مما يحدد قدرة خلاياي على تحميل التركيزات ذات الصلة سريريا والاحتفاظ بها.

بعد ذلك ، يتم تحديد معدل إطلاق الدواء من خلاياي من أجل التأكد من أن خلاياي تتمتع بخصائص الإطلاق في المختبر المناسبة قبل تقييم الاستقرار في الجسم الحي. تظهر النتائج أن خلاياي المستقرة التي يتم إنشاؤها بشكل متكرر يمكن أن توفر منصة لمتابعة توصيل الأدوية في حالات المرض المختلفة بناء على تقنيات التقييم المعروضة هنا. الميزة الرئيسية لهذه التقنية أو الطرق الحالية مثل تحميل التوازن أو طرق غسيل الكلى ، هي أنه يمكن تحضير الميوسين بشكل أسرع بكثير مع تحميل الأدوية القابلة للتكرار وحجمها.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو العلاج أو تشخيص حالات المرض المختلفة لأن الأدوية النانوية توفر فرصا تتجاوز الأشكال التقليدية ، بشكل عام ، قد يعاني الأفراد الذين بدأوا للتو من هذه التقنيات على الرغم من أنها بسيطة لأنه لا يزال بإمكانك إجراء دراسات الإطلاق ، لا يمكنك حقا تقييم تأثير الانفجار. سيظهر هذا الإجراء شامان ديوك ، طالب الدراسات العليا ، وديبا المتعاون معي أولا ، ويزن ملليغرام واحد من DTX ، ومليغرام واحد من EVR و 15 ملليغرام من Peg 4 ، 000 block PLA 2200 للدواء المزدوج My Cells أو DDM. بعد الوزن ، قم بإذابة الأدوية والبوليمر في 0.5 مل من نتريل الأسيتو ، ثم انقل المحلول إلى قارورة قاعية مستديرة سعة خمسة ملليلتر تشكل طبقة بوليمر رقيقة موزعة عن طريق تبخير محلول أسيتو بوليمر الدواء تحت ضغط منخفض باستخدام مبخر دوار.

بعد ذلك ، قم بإعادة ترطيب فيلم بوليمر الدواء مع 0.5 مل من الماء منزوع الأيونات المسخن مسبقا عند 50 درجة مئوية ورج القارورة برفق في حمام مائي 50 درجة مئوية لتشكيل خلايا الفئران. أضف المحلول إلى أنبوب الطرد المركزي وقم بالدوران عند 7 ، 200 مرة جم لمدة ثلاث دقائق. ارسم المحلول بإبرة وقم بتصفية محلول Micella الناتج في أنبوب طرد مركزي جديد سعة 1.5 مليلتر باستخدام مرشح نايلون 0.2 ميكرون لإزالة أي دواء أو ملوثات لم يتم حلها في هذه المرحلة ، قم بإجراء تحليل HPLC في المرحلة العكسية باستخدام عمود C ثمانية متوازن عند 40 درجة مئوية في الوضع السقراطي مع مرحلة متنقلة من تجربة الأسيتيل الأول وتخفيف الماء الخلايا المعدة حديثا في تجربة العين الآس في نسبة واحد إلى 100 قبل التحليل بواسطة HPLC في المرحلة العكسية لتحديد تحميل الدواء الأولي.

بعد تخزين خلاياي غير المخففة في درجة حرارة الغرفة لمدة 48 ساعة ، قم بإعداد عينات مخففة جديدة لإعادة التقييم عن طريق الطور العكسي HPLC وتحديد استقرار الدواء في خلاياي على مدار 48 ساعة. راقب قمم DTX و DVR عند 227 و 279 نانومتر مع أوقات احتفاظ تبلغ 1.7 و 5.7 دقيقة على التوالي. اعرض البيانات كمتوسط زائد أو ناقص الانحراف المعياري لتحميل الدواء.

بعد ذلك ، قم بتخفيف خلاياي المحضرة حديثا والماء منزوع الأيونات بنسبة واحد إلى 20 te تركيز البوليمر النهائي من 1.5 ملليغرام لكل مليلتر. انقل المحلول إلى طبيب بيطري لقياس تشتت الضوء الديناميكي. قم بقياس شدة ليزر النيون الهيليوم عند 173 درجة لتحديد التشتت.

اعرض البيانات كمتوسط حجم Z زائد أو ناقص الانحراف المعياري جنبا إلى جنب مع مؤشر تشتت بولي أو PDI للتوزيع. بعد تحضير DDM كما هو موضح سابقا ، قم بتحميل 2.5 مل من خلاياي في شريط غسيل الكلى سعة ثلاثة ملليلتر مع قطع الوزن الجزيئي يبلغ 7،000 جرام لكل مول. ضع الكاسيت في 2.5 لتر من محلول فوسفات 10 مللي مولار 7.4 درجة حموضة خلال الفترات التالية.

اسحب 150 ميكرولترا من المحلول واستبدلها ب 150 ميكرولترا من العازلة الطازجة. قم بتغيير المخزن المؤقت كل ثلاث ساعات لضمان ظروف المزامنة. تحليل العينات باستخدام HPLC ذو الطور العكسي لتحديد منحنى تركيز الدواء.

تناسب بيانات إطلاق الدواء بناء على نموذج انتشار بسيط مع ارتباط أسي أحادي الطور باستخدام البرنامج الإحصائي D-T-X-E-V-R وأظهر DDM استقرارا مشابها في PEG 2000 block PLA 1800 أو PEG 2000 block PLA 2200 على مدار 48 ساعة. احتفظت خلاياي ب 97٪ أو أكثر من التحميل الأولي في 48 ساعة في درجة حرارة الغرفة. بناء على نتائج تشتت الضوء الديناميكي ، أظهرت جميع خلاياي توزيعا أحادي النمط بقيم PDI أقل من 0.2.

بناء على البيانات ، كان إصدار DTX من mycells الفردية و DDM حوالي 60٪ على مدار 48 ساعة. كان إطلاق EVR من خلاياي الفردية و DDM 60٪ و 50٪ على التوالي. يتم عرض الوقت اللازم لإطلاق المخدرات بنسبة 50٪ من خلاياي الفردية و DDM وجودة البيانات الملائمة هنا.

جودة تركيب المنحنى لجميع خلاياي باستثناء EVR الفردي ، خلاياي أعلى من 0.950 ، مما يعني أن افتراض إطلاق الدرجة الأولى هو تقريب جيد لشرح إطلاق الدواء من خلاياي الفردية و DDM بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنيات بشكل روتيني على مكتبة من الأدوية والبوليمرات كخلاياي في غضون ساعات إلى أسبوع. أثناء حضور هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر توصيف خلاياي تماما قبل الوصول إلى مزرعة الخلية أو النماذج الحيوانية التي تتبع هذه الإجراءات. يمكن أيضا تقييم أو توصيف أنظمة التوصيل الأخرى مثل نظام التوصيل الشحمي من أجل الإجابة على السؤال حول دور نظام توصيل الدواء في فعالية العلاج.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير وتوصيف الدواء الذي يحمل خلاياي قبل تقييمها في المرض. حالة الاهتمام.