موجهة بالليزر العصبية للبحث عن المفقودين في إإكسبلنتس الدماغ

الهدف العام من هذه الطريقة هو تسمية الخلايا العصبية وإسقاطاتها المحورية من أجل تتبع اتصالاتها بنواة الدماغ المستهدفة أو المصدر ذات الأهمية. تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في علم الأعصاب مثل أنماط الاتصال بين المناطق المختلفة أو المجموعات السكانية العصبية الفرعية في الدماغ ، بالإضافة إلى أهميتها الوظيفية لدائرة عصبية معينة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي زيادة دقة الهدف أثناء حقن التتبع.

يتم تحقيق ذلك باستخدام المعدات البصرية الأساسية لتصور نوى الدماغ المسماة بالفلورسنت. ميزة أخرى لهذه الطريقة هي أنها تسمح بالتنميط الجيني غير الجراحي لكرات الفئران التي تعبر عن بروتينات الفلورسنت تحت سيطرة المحفزات العصبية. عند التنميط الجيني ، تحقق من التعبير عن علامات الفلورسنت المعنية باستخدام مؤشر ليزر مع الطول الموجي المناسب للإثارة

في الوقت نفسه ، ارتد نظارات المرشح التي تمنع الطول الموجي للإثارة ، ولكنها تمر بالطول الموجي للانبعاث. وجه الليزر إلى مؤخرة الرأس أو الحبل الشوكي للجرو المعني. احرص على عدم تسليط الليزر في عيون P والحفاظ على التعرض لليزر قصيرا.

يجب أن تكون علامات الفلورسنت المثارة مرئية من خلال الجلد. عندما يكبر الفأر ، يمكن تحديد الخلايا العصبية الفردية للأنسجة المحصودة. بعد تخدير الفأر والتحقق من عدم وجود رد فعل ، قم بإزالة الجلد فوق الجمجمة ، وقطع الجلد على طول الجزء الخلفي من الرأس إلى منتصف الجمجمة.

حتى في الفئران الأكبر سنا التي يزيد عمرها عن شهر واحد ، يمكن ملاحظة التألق من خلال عيون. بعد ذلك ، باستخدام PBS trans Cardi المثلج ، قم بتقطيع الإيجابي باستخدام إبرة قياس 30 ، بعد خمس إلى 10 دقائق ، ستتم إزالة معظم الدم. ثم قم بإزالة الدماغ وتشريح المنطقة التي تهمك.

هنا ، يحتوي الجسم شبه المنحرف ، وهو بصيلان بارزان في المنطقة البطنية من الدماغ ، على منطقة الاهتمام. تبدأ النوى البطنية للأجسام شبه المنحرفة أو VNTB بنقل منطقة الدماغ المزروعة ذات الأهمية إلى طبق من محلول التشريح المؤكسج. هناك. قم بتأمين explan بإبر حقنة قياس 30 بحيث يمكن الوصول إلى منطقة الحقن في الأعلى.

للحقن ، استخدم ماصات الحقن المسحوبة بالزجاج Bo سيليكات والتي يتم تصنيعها في ثلاث أو أربع دورات سحب. قم بتحميل الماصة بالمحلول التالي. الوحدة الفرعية لسم الكوليرا B مقترنة ب Alexa FLUORA 4 5 55 ، والتي تستخدم بشكل أساسي للنقل إلى الوراء

باستخدام مؤشر الليزر وماصات الحقن، التي تم تركيبها جميعا وجاهزة للاستخدام ، استمروا في توجيه الشعاع إلى منطقة الدماغ أو الخلايا المراد حقنها المصنفة. راقب الحقل من خلال نظارات المرشح التي تمر بالنطاق لمعرفة الخلايا العصبية التي يجب استهدافها باستخدام ماصة الحقن. استخدم المعالج الدقيق لوضع الماصة في منطقة الاهتمام.

ثم باستخدام حاقن ضغط مضبوطة لتوصيل نبضات 50 مللي ثانية عند 15 حصانا ، أقوم بحقن مادة التتبع في نبضتين إلى 10 نبضات. اترك 10 إلى 15 ثانية للمرور بين النبضات حتى تنتشر الصبغة المحقونة. عند حقن رباعي إيثيل الروم ، تحفز المنطقة كهربائيا باستخدام القطب المحفز الذي يوفر نبضات TTL.

تأكد من تأريض القطب في محلول الحمام. قم بتوصيل ثماني نبضات TTL بطول ثمانية فولت كل منها 50 مللي ثانية بفواصل زمنية تبلغ 50 مللي ثانية. حفز المنطقة بتكرار النبض من 10 إلى 20 على مدى عدة دقائق.

تختلف نوى الدماغ في الحجم والكثافة العصبية وأنواع الخلايا. هذا يعني أن مدة وعدد الضغط و / أو النبضات الكهربائية قد تحتاج إلى تعديل لتحقيق نتائج وضع العلامات المثلى لمنطقة معينة من الدماغ. باستخدام الليزر والنظارات الواقية ، تحقق من إشارة تتبع الفلورسنت.

يجب أن تمتص الخلايا الصبغة وتنتشر حول المنطقة المحقونة. بعد الحقن ، يحتضن الدماغ في السائل النخاعي الدماغي الاصطناعي المؤكسج في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة إلى أربع ساعات. حافظ على الأكسجين أثناء الحضانة ، ثم قم بإصلاح الأنسجة في 4٪ ألدهيد باراكولاتيكل.

في PBS بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية في اليوم التالي ، يمكن تقطيع الأنسجة وتركيبها بحقنة تداخل في النواة البطنية للجسم شبه المنحرف أو VNTB. يظهر استخدام رباعي إيثيل رودين دكسترين أن الإسقاطات من VNTB تمتد إلى النواة الإنسية للجسم شبه المنحرف ، أو MNTB. ثم تم حقن MNTB ب chole toin ، الوحدة الفرعية B ، والتي وصفت إلى حد كبير VNTB.

بمزيد من التفصيل ، يبدو أن سوماتا خلايا VNTB المعوية السكرية قد تم تصنيفها بعد ذلك. تم حقن MNTB بالملصق الرجعي dexttrin tri. على عكس النمط المنقط لوضع العلامات على CTB ، كان وضع العلامات على دكسترين كثيفا وشبه GOGI.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تسمية الخلايا العصبية وعملياتها مع زيادة الدقة. تساعدك التقنية التي تم إثباتها على تحديد مناطق الدماغ والمجموعات السكانية الفرعية للخلايا العصبية المشاركة في دائرة عصبية معينة بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء الحقن في حوالي 30 دقيقة إذا تم إجراؤه بشكل صحيح. يمكن دمج هذا الإجراء بسهولة مع طرق أخرى مثل الكيمياء المناعية أو تطهير الدماغ للإجابة على أسئلة إضافية تتعلق بالتشكل أو الاتجاه أو وظيفة الإسقاطات العصبية والهياكل العصبية الأخرى.