متعدد الوسائط التصوير النهج استناداً إلى التصوير المقطعي الجزيئية الصغيرة-الأشعة المقطعية والأسفار لتقييم طولية لتليف الرئة الناجمة عن بليوميسين في الفئران

الهدف العام لهذه الدراسة على نموذج فأر يشبه IPF هو مراقبة تليف الرئة طوليا باستخدام تقنيات التصوير غير الغازية مثل FMT و micro-CT. يمكن أن تقدم هذه الطريقة التسلسل فيما يتعلق بهذه الأحداث الجزيئية المحددة التي تحدث في تليف الرئة. الميزة الرئيسية لهذه التقنيات هي أنه يمكن مراقبة التغيرات التشريحية لأحداث جزيئية معينة بشكل غير جراحي.

تمتد تطبيقات هذه التقنيات نحو علاج أمراض IPF لأن دمج FMT و micro-CT يمثل إمكانية دراسة تطور المرض وتقييم العلاج الجديد. ابدأ بوضع فأر مخدر على منصة التنبيب معلقة بقواطعه الموضوعة على السلك. قم بتشغيل منظار الحنجرة ، ثم خذ زوجا من الملقط غير الحاد وافتح الفم برفق.

ضع شفرة منظار الحنجرة باتجاه الجزء الخلفي من الفم حتى يتم تصور فتحة القصبة الهوائية. استخدم اليد الأخرى لإدخال أنبوب التوصيل المتصل بنهاية أنبوب PE في القصبة الهوائية. قم بتدوير الصمام ثلاثي الاتجاهات لتوصيل 50 ميكرولتر من البليومايسين.

بعد التثبيت ، قم بإزالة الأنبوب بسرعة من القصبة الهوائية لمنع الاختناق. امسك الفئران في وضع مستقيم لبضع ثوان. لحقن المسبار ، خذ الماوس من الذيل واتركه يمسك بغطاء القفص.

ثم أمسك الكتفين وامسك بالماوس من القفص. اغمر الذيل في دورق من الماء الدافئ لإحداث انتفاخ الأوردة لتسهيل الرؤية وإدخال الإبرة. ابحث عن الوريدين الذيليين على جانبي الذيل ، وليس الشريان الموجود على الجانب السفلي من الذيل.

أدخل الإبرة المقاسة 26 من حقنة MMP المحملة بسعة 1 مليلتر في الوريد وحقن محلول مسبار MMP بمعدل 10 ملليلتر لكل كيلوغرام من وزن الجسم. للبدء في تهيئة برنامج الحصول على التاريخ وفتح دراسة جديدة في قاعدة البيانات للتجربة. قبل البدء في التصوير ، انقل الفأر المحلوق والمخدر إلى منتصف كاسيت التصوير.

حافظ على الماوس مسطحا وآمنا ومضغوطا برفق على نافذتي علبة التصوير. ثم في نافذة المسح الضوئي للبرنامج ، انقر فوق الموضوع "ثم معاينته لرؤية الصورة الحية. ارسم منطقة المسح كبيرة بما فيه الكفاية بحيث يتم التقاط الأنسجة المحيطة بالمنطقة المتوقعة من الفلورة.

بمجرد سحب عائد الاستثمار ، انقر فوق إضافة إلى قائمة انتظار إعادة الإعمار "ثم انقر فوق مسح" لتصوير الماوس. عند اكتمال الحصول على الصورة، قم بإزالة الماوس من علبة التصوير وضعه مرة أخرى في القفص المنزلي. قم بتحديد كمية البيكومول الفلورية باستخدام أداة ROY وتقليل عائد الاستثمار حوالي 700 إلى 800 ملليمتر مكعب على الإشارة القادمة من منطقة الرئة.

كرر التصوير كل سبعة أيام أو حسب الحاجة. للتصوير بواسطة التصوير المقطعي المحوسب الدقيق، قم أولا بتشغيل التصوير المقطعي المحوسب الصغير بالضغط على زر الطاقة الأخضر وقم بتشغيل البرنامج لتسخين مصدر الأشعة السينية. قم بإنشاء قاعدة البيانات بالنقر فوق قاعدة بيانات جديدة"، وقم ببناء المتصفح بناء على عدد الفئران في التجربة.

قبل بدء الفحص ، حدد معلمات الاكتساب في نافذة التحكم في البرنامج على النحو التالي. اضبط جهد أنبوب الأشعة السينية على 90 كيلو فولت ، وتيار أنبوب الأشعة السينية المقطعي المحوسب إلى 160 أنجستروم صغير ، وتيار أنبوب الأشعة السينية الحي إلى 80 أنجستروم صغير ، ومجال الرؤية إلى 36 ملم. حدد عدم وجود تقنية بوابات "ودقة عالية" وأربع دقائق لتقنية المسح.

بعد تخدير الفأر عن طريق استنشاق 3٪ من الأيزوفلوران ، ضعه على فراش الذي يتم إدخاله في التجويف الصغير مع مخروط الأنف الذي يوفر إمدادا ثابتا من التخدير. شل حركة الكفوف بشريط لاصق على السرير للسماح بكشف الصدر. على الجانب التالي ، أغلق باب الجهاز وقم بتشغيل الوضع المباشر لرؤية موضع الماوس في الوقت الفعلي بالضغط على زر الالتقاط.

حرك فراش لمحاذاة الصدر مع مجال الرؤية باستخدام الأزرار الموجودة على جهاز التصوير المقطعي المحوسب. بمجرد توسيط الماوس ، قم بتدوير الرافعة العملاقة لتأكيد وضع السرير الأمثل عن طريق تحديد 90 درجة والنقر فوق تعيين"ثم انقر فوق زر التصوير المقطعي المحوسب. انقر فوق نعم"للرسالة التي تعلم أنه سيتم تشغيل مصدر الأشعة السينية.

بعد التصوير ، ضع مرة أخرى في القفص وراقبها حتى تتعافى تماما من التخدير. كرر التصوير كل سبعة أيام أو حسب الحاجة. يكشف التلوين بثلاثي الألوان لماسون عن التشكل في أنسجة الرئة.

أظهرت صور المجموعة المعالجة بالبليومايسين نمطا واضحا من التليف بدءا من اليوم السابع بشكل أساسي ككتل ليفية مفردة وتطورت في اليوم 14 إلى تكتلات ملتقية من الكولاجين البديل وظلت دون تغيير حتى اليوم 21. سمح التصوير المصغر المتكرر بالتصوير المقطعي المحوسب بقياس وتجزئة الشعب الهوائية في فصوص الرئة التليفية. تم تقسيم المسالك الهوائية إلى جزء مركزي وبعيد.

الجزء البعيد من الشعب الهوائية هو السبيل الرئوي وينقسم إلى فصوص الرئة مثل الفص القحفي الأيمن ، والفص الأوسط الأيمن ، والفص الذيلي الأيمن ، والفص الإضافي الأيمن ، والرئة اليسرى. أظهر القياس الكمي لنصف قطر مجرى الهواء زيادة في نصف القطر في الفئران المعالجة بالبليومايسين مقارنة بالضوابط المالحة. تمثل كل نقطة متوسط الخطأ المعياري لمتوسط خمسة ليصبح المجموع 30 فأرا.

يوضح القياس الكمي الكلي للتليف الرئوي للفئران المعالجة بالمركبة أو البليومايسين في نقاط زمنية مختلفة أن معلمات التصوير المقطعي المحوسب الدقيقة هذه تتفق مع النتائج النسيجية. بمجرد إتقان هذه التقنية يمكن إجراؤها لفحص المخدرات بشكل روتيني. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحث في مجال مرض التليف الرئوي لاستكشاف كفاءات العلاج المتكرر في النماذج الحيوانية الشبيهة ب IPF.