أغسطس 15, 2019
مرحبا بكم في مجموعات طرق JoVE حول طرق أبحاث البلاستيدات الخضراء التي أشرف عليها محررنا الضيف، بول جارفيس. تغطي هذه المجموعة مجموعة واسعة من تقنيات المختبر والتقنيات في الجسم الحي التي تميز تفاعلات البروتين داخل البلاستيدات الخضراء. يصف باحثون في جامعة أكسفورد طريقة في المختبر باستخدام بلاستيدات خضراء معزولة، يتم حضانها ببروتينات موسومة بالإشعاع لمراقبة امتصاصها.
هذه الطريقة هي تطوير لأساليب سابقة استخدمت لدراسة استيراد البروتينات الخضراء في المختبر. بعد ذلك، بطريقة مكملة، يتم فحص استيراد بروتين البلاستيدات الخضراء في الجسم الحي. تستخدم هذه الطريقة التعبير العابر للبروتينات الكيميرية والبروتوبلاستات لفحص تغيرات حجم البروتين وتحديد الموقع عبر القطع المناعية والمجهر الفلوري.
في هذا الفيديو المنهجي، فحص المؤلفون نظام الغشاء الثيلاكويدي الموجود في البلاستيدات الخضراء. عن طريق عزل الأغشية، يتم توضيح مسارات انتقال البروتين في البلاستيدات الخضراء بواسطة SDS-PAGE والتصوير الفسفوري. يستخدم الباحثون في فرنسا طرقا مختلفة للطرد المركزي لعزل الأقسام الفرعية الموجودة في البلاستيدات الخضراء.
ثم يتم تحليل هذه الأجزاء الخلوية المعزولة بواسطة الضربات المناعية والبروتيوميات لتوفير معلومات حول التموقع تحت العضي لبروتينات البلاستيدات الخضراء. بعد ذلك، استخدم الباحثون السويسريون تنقية الألفة لمجمعات البلاستيدات الخضراء متعددة البروتين لفحص الآليات الجزيئية المشاركة في استيراد البروتين. تحديدا مركبات التحدث والبروتينات متعددة القراد المدمجة في أغشية المغلف.
في نهج مكمل، يقوم العلماء بتوصيف مركب بروتين الثيلاكويد النباتي في الأرابيدوبسيس باستخدام بلو نيتيف PAGE، أو BN-PAGE، الذي يسمح بفصل مركبات البروتين في شكلها الأصلي والوظيفي. يتم تحليل المجمعات بشكل إضافي عبر صفحات SDS ثنائية الأبعاد. لقد لمحت للتو الطرق المختلفة المستخدمة لدراسة بروتينات البلاستيدات الخضراء في مجموعتنا لطرق JoVE.
يمكنك مشاهدة المقالات بالتفصيل في صفحة مجموعة طرق أبحاث البلاستيدات الخضراء المعروضة على الرابط الموجود على الشاشة.
تقدم مجموعة طرق JoVE هذه حول طرق أبحاث البلاستيدات الخضراء مجموعة شاملة من التقنيات المتكاملة المخبرية (in vitro) والحيوية (in vivo) لدراسة استيراد بروتينات البلاستيدات الخضراء، وتحديد مواقعها، والتجزئة تحت العضية، والتفاعلات بين البروتينات. تركز المجموعة على النبات النموذجي Arabidopsis thaliana ولكنها قابلة للتطبيق على كائنات أخرى. وتشمل الطرق مقاييس السلائف الموسومة إشعاعياً، وتتبع البروتينات الخيمرية الفلورية، ودراسات انتقال الثايلاكويد، والتجزئة تحت الخلوية، والتنقية بالتقارب (TAP-tag)، والرحلان الكهربائي للهلام بتركيز طبيعي (BN-PAGE) لتحليل المعقدات. تتيح هذه النهج إجراء استقصاء مفصل عن التخليق الحيوي للبلاستيدات الخضراء ووظائفها، وخاصة البروتينات العضية.
تُعد دراسات استهداف بروتينات البلاستيدات الخضراء وتحديد تموضعها وتفاعلاتها أمراً بالغ الأهمية لتطوير التقانة الحيوية النباتية، لا سيما في تحسين كفاءة التمثيل الضوئي والقدرة على مقاومة الإجهاد. وتتيح هذه الطرق تقليل المخاطر الميكانيكية وتعزيز الثقة التنبؤية في مرحلة الاكتشاف، مما يدعم الاستمرارية الانتقالية من الرؤى الجزيئية إلى الابتكار الزراعي التطبيقي. كما أن دمج هذه التقنيات في مسارات البحث والتطوير يعزز عملية اتخاذ القرار بشأن محفظة تحسين المحاصيل ومبادرات الطاقة الحيوية.
تتكامل طرق أبحاث البلاستيدات الخضراء هذه عبر تسلسل الاكتشاف، بدءاً من الاختبار المبكر للفرضيات والتحقق من الأهداف وصولاً إلى تطوير السمات قبل السريرية في التكنولوجيا الحيوية النباتية.