الضغط تلميع الماصات لتسجيل باتش تحسين المشبك

تبدأ هذه العملية بوضع طرف الماصة بالقرب من سلك التلميع عند تكبير 100 مرة. بعد ذلك، يتم تشغيل ضغط الهواء والحرارة. السلك.

ستتمدد طرف الماصة لتشكل طرفاً مسطحاً. قم بإيقاف التسخين للحصول على فتحة طرف أصغر. قم بإيقاف الضغط والتسخين مرة أخرى.

مرحباً، أنا براندون جونسون من مختبر الدكتورة ميريام جودمان في قسم الفسيولوجيا الجزيئية والخلوية بجامعة ستانفورد. سنعرض لكم اليوم إجراءً لصقل ماصات الرقعة باستخدام الضغط (pressure polishing patch pipettes). نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة القنوات الأيونية ورقع الغشاء في عصبونات NC elgan.

لنبدأ الآن. اسحب مجموعة من ست إلى 10 من الماصات الرقعية (patch pipettes). استشر خبيراً محلياً أو شاهد تجربتنا المرئية حول "صنع الماصات الرقعية والأقطاب الحادة باستخدام جهاز سحب قابل للبرمجة" للحصول على المساعدة.

لبدء الإجراء، اضبط ضغط خط الهواء المضغوط على حوالي 40 PS.I، ثم قم بتوصيل خط الهواء المضغوط بصمام تحكم رباعي الاتجاهات. قم بتوصيل قطعة من الأنبوب البلاستيكي بالصمام رباعي الاتجاهات وقم بتثبيت حامل ماصة عالي الضغط في الطرف الحر من الأنبوب البلاستيكي. استخدم منصة صهر دقيقة (micro forge rig) لإجراء عملية التلميع.

نستخدم مجموعة Ccpm two من شركة LA Scientific. يشتمل هذا الجهاز على حامل ماصة للضغط العالي، وسلك تسخين من البلاتين يتم التحكم فيه بواسطة دواسة قدم، ومجهر مجهز بعدسات شيئية هوائية ذات مسافة عمل طويلة بتكبيرات منخفضة وعالية (10 مرات و100 مرة). وتعد هذه العدسات مثالية لأنه من الضروري أن يكون الباحث قادراً على مراقبة فتحة الماصة أثناء تنفيذ البروتوكول.

بعد ذلك، تحقق من أن صمام الضغط في وضع الإيقاف. ثم ضع الماصة في حامل الماصة وأحكم ربط الوصلة يدوياً لضمان سلامة المختبر. تأكد من أن الماصة مثبتة بإحكام في حامل الماصة.

وإلا، فإن ضغط الهواء سيتسبب في خروج الماصة من الحامل. وكخطوة اختيارية، يمكنك طلاء الماصة بعازل كاره للماء مثل الشمع لتقليل السعة الكهربائية وتحسين خصائص الضوضاء. الآن، ضع الماصة في الحامل في موضع المِصْهر الدقيق (micro forge)، ثم ضع حامل الماصة على منصة المجهر بحيث يكون كل من الطرف وسلك التلميع مرئيين تحت قوة تكبير منخفضة تبلغ 10 مرات في المِصْهر الدقيق.

قرب الطرف على مسافة 50 ميكرون تقريباً من خيط التلميع، ثم انتقل إلى العدسة الشيئية 100 ذات القدرة العالية، بحيث يكون كل من طرف الماصة وخيط التلميع في بؤرة التركيز وضمن مجال الرؤية. وإذا لم يكن الأمر كذلك، فقم بتعديل ارتفاع خيط التلميع. ونظراً لعدم إمكانية تعديل موضع الماصة، يجب أن يكون طرف الماصة وخيط التلميع على جانبين متقابلين من مجال الرؤية.

تجنب وضع طرف الماصة قريبًا جدًا من الفتيلة لأنها ستتمدد أثناء التسخين وقد تصطدم بالماصة. بمجرد وضع الطرف والفتيلة بشكل صحيح، أدر الصمام لتوجيه الهواء المضغوط إلى الماصة وتسخين طرفها حتى يبدأ التخصر خلف الطرف في الانتفاخ للخارج. أوقف التسخين قبل أن ينتفخ الطرف بشكل مفرط.

تتطلب العملية إجراء تجارب لتحديد المسافة والحرارة والوقت المناسبين للوصول إلى الشكل المطلوب. وكخطوة اختيارية، يمكن صقل الطرف في غياب الضغط من أجل تقليل قطر فتحة الطرف. كما يجب مراعاة إمكانية تكرار خطوات الصقل هذه للوصول إلى الدقة المطلوبة.

قم بضبط شكل وأبعاد رأس الماصة. وعند اكتمال عملية التلميع، أوقف تشغيل نقطة الضغط ووجّه رأس الماصة في اتجاه آمن.

أزل الماصة وضعها في صندوق تخزين نظيف حيث تكون محمية من الغبار. ولضمان سلامة المختبر، تأكد من إيقاف تشغيل الضغط قبل إزالة الماصة؛ وإلا فقد تنفلت من حامل الماصة.

بعد الإزالة، لقد عرضنا لكم للتو كيفية صقل الماصات بالضغط لتحسين تسجيلات تثبيت الرقعة (patch clamp). عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر تغليف ملف الصقل بزجاج ذي درجة انصهار عالية من أجل تقليل ترسب المعدن المتبخر على الماصات، وتوخي الحذر أثناء تعرض الماصات للهواء المضغوط.

تأكد من تثبيت الماصة بإحكام في الحامل، وقم بإيقاف تشغيل الهواء قبل إزالة الماصة من الحامل. هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة.

نتمنى لكم تجربة ممتعة في الصقل بالضغط، وبالتوفيق في تجاربكم.