FITC-葡聚糖饲喂法：一种定量检测肠道通透性的方法 秀丽隐杆线虫

- C. elegans 是 使用 作为 一个 实验的 模型 的 感染 由 肠道 病原体 哪个 导致 疾病, 在 部分， 由 破坏 的 肠道 屏障, 增加 它的 通透性 为了 量化 屏障 完整性 之后 暴露 到 a 细菌 或 化学 化合物 的 兴趣 收集 线虫 由 洗涤 它们 关闭 他们的 平板

接下来， 将 这些 线虫 放置于 琼脂 平板 上， 平板上的 食物 由 热灭活的 大肠杆菌 E. coli 与 FITC-葡聚糖 混合而成， 其中 FITC-葡聚糖 是一种 高 分子量 的 多糖， 带有 荧光标记。

让 线虫 摄取 标记的 细菌。 具有 完整 肠道屏障的个体将迅速清除食物，而肠道通透性较高的线虫中，荧光标记物则会穿透器官管腔，扩散至腔外。 那些 拥有 完整 肠道 屏障的 个体 会 迅速 清除 食物， 而 在 肠道 通透性 更高 的 线虫中， 荧光 标记物 将 会 穿透 并 扩散至 器官 的 管腔 之外。

将 线虫 转移至 一 种 甲醛溶液 中 以固定 这些 动物。1 至 2 分钟 后，用 封片 介质 替换 甲醛 溶液。

最后， 通过荧光显微镜 对 线虫 进行 成像 观察。 需要注意的是， 秀丽隐杆线虫 C. elegans 肠道颗粒具有自发荧光特性， 因此会存在 背景 信号。 但总体而言， 肠道荧光越强， 表明 通透性 越高。 信号强度 但 总体而言， 更高的 肠道 荧光 表明 更高的 通透性。

在 的 示例 方案 我们 将 检测 的 效应 的 治疗 与 的 生物分子 DIM 在 的 肠道 通透性 的 线虫 感染的 与 致病的 假单胞菌 aeruginosa 细菌

- 准备 的 FITC-葡聚糖补充的 培养皿 由 混合 2 毫升 的 热灭活 E. coli 与 4 毫克 的 FITC-葡聚糖 添加 100 微升 的 的 混合物 到 每个 的 20 新鲜 NGM 琼脂 培养皿 和 允许 的 平板 至 干燥 用于 一 小时 开启 a 清洁 实验室 实验台 之后 48 小时 的 治疗 洗涤 的 线虫 与 S 缓冲液 转移 他们 到 FITC-葡聚糖 补充 平板 和 到 NGM 培养皿 无 FITC-葡聚糖 和 孵育 的 培养皿 过夜。

的 下一步 天 洗涤 的 线虫 与 S 缓冲液 和 允许 它们 到 爬行 在 的 新鲜 NGM 琼脂 培养皿 用于 一 小时 添加 50 微升 的 4% 甲醛 到 每个 良好 的 a 黑色 96孔 平底 平板 和 转移 大约 50 线虫 进入 每个 好。 之后 1 到 2 分钟 移除 全部 的 甲醛 和 添加 100 微升 的 封片 培养基 进入 每个 好。

- 甲醛 是 一 种 有毒 化 学 物 质 ， 应 小心操作。