为什么压力循环能够提高从质外体中获得的细菌产量？

反复的正负压循环产生剪切力，可在不裂解细菌或损伤植物组织的情况下破坏微菌落，从而提高可存活细胞的回收率用于分析。

密封注射器尖端如何影响提取效率？

使用石蜡膜密封可形成一个封闭的腔室，这对于有效建立和释放压力至关重要，从而确保在压缩和扩张阶段细胞壁间隙内的液体交换。

什么表明正压应用成功？

组织变暗表明水分进入细胞间隙并压缩质外体，有助于从细胞壁上清除附着的细菌微菌落。

无碎片提取为何对下游分析至关重要？

去除植物残渣可减少单细胞RNA测序或代谢组学分析中的污染和干扰，提高数据质量和对低丰度细菌信号的检测灵敏度。

该方法如何支持在不同实验室之间的重复验证？

使用注射器和密封材料的标准化压力方案可实现稳定的质外体液体回收，从而在多中心靶点验证研究中获得可重复的结果。

使用基于注射器加压法提取质外体细菌

JoVE Encyclopedia of Experiments

微生物学

0 次观看 • 2:28 分钟 • November 28th, 2025

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取一株叶片预先接种了细菌的拟南芥（Arabidopsis）植株，以研究植物-微生物相互作用。

这些细菌在植物细胞间的细胞间隙（即质外体）中增殖，形成微菌落。

一旦建立质外体定植，切除叶片并将其放入无针头的注射器中。

加入蒸馏水以浸没组织。

插入活塞，然后将注射器竖直握住，轻弹注射器，并调节活塞以排出任何被困的空气。

用封口膜密封尖端，以形成封闭的质外体提取腔室。

推动活塞施加正压，直至组织变暗，表明组织受到压缩且水已进入细胞间隙，从而将细菌从间隙中冲出。

接下来，通过拉动活塞施加负压，以扩张组织基质并抽出液体和细菌。

重复进行压力循环，以产生剪切力破坏微菌落，从而在不损伤植物组织的情况下释放细菌。

打开注射器，收集含有分散细菌的质外体液体，用于后续分析。

接种后第四天，剪取地上部分 拟南芥 将植物或接种过的菜豆叶片放入一支20毫升无针头的注射器中。

对于豆类叶片，将叶片自身卷起，使远轴面朝外。加入足量蒸馏水以浸没组织。然后，将装有活塞的注射器竖直插入，轻轻敲击注射器筒体以排出内部多余的空气和气泡，使所有空气聚集至尖端附近；排尽空气后，用石蜡膜封住注射器筒体的尖端。

现在小心按压柱塞以产生正压，直至组织颜色变深。然后，回拉柱塞以产生负压。移除石蜡膜和柱塞，并收集含有质外体提取细菌的液体。