$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
从安装在显微镜载物台上的微流控装置开始。
该装置由聚合物-玻璃组件构成,内部封装了一条带有圆柱形柱阵列的微通道,用以模拟多孔介质。
注射泵将培养基通过带有滤器的注射器注入通道,液体经出口管路排入废液容器中。
使用连接到通道的传感器监测基础流体压力。
将出口管路放入含有细菌悬液的试管中。
反转流速,直到悬浮液充满通道,同时滤膜可防止细菌进入注射器。
孵育以使细菌细胞附着于表面、增殖并启动生物膜形成。
然后,移除滤膜并将出口端放回废液容器中。
恢复培养基流动,并在生物膜生长并堵塞通道时监测压力。
拍摄延时显微图像,以观察生物膜随时间的生长过程。通过将生物膜生长与压力变化相关联,研究多孔介质中的生物堵塞现象。
实验开始前3小时打开显微镜的培养箱,以确保温度稳定在25摄氏度。
将进样和出样管路连接到微流控装置上。通过将外径为0.6毫米的针头插入进样管路,固定管路与注射器之间的连接。将微流控装置、30毫升去离子水和30毫升培养基放入真空干燥器中,抽真空脱气至少一小时。
完成后,缓慢将培养基和去离子水分别吸入两个 30 毫升的注射器中。然后,将微流控装置安装到显微镜上,并将出口管路放入废液容器中。通过微流控管路将装有去离子水的注射器连接至微流控通道,并缓慢注入水,直至水从压力传感器出口流出。
用水填充压力传感器,并冲洗连接微流控通道与压力传感器的管路中所有气泡。使用专用于压力传感器的螺丝封闭其出口。用去离子水填充微流控通道的其余部分。
接下来,将一个1.2微米的滤膜安装到培养基注射器上。取下水注射器,并小心地将该注射器连接至微流控入口管路。将注射器安装到注射泵上后,以每小时2毫升的流速用培养基冲洗通道1小时。
随后,在实验过程中将注射泵设定为所需的流速,并将压力传感器的压力读数归零。接下来,用移液器吸取1毫升的 枯草芽孢杆菌 光密度值为0.1(600纳米波长)的NCIB 3610菌液,置于1.5毫升离心管中。将微流控通道的出口管插入离心管内,静置5分钟,以排除出口管中可能存在的气泡。
完成后,以每小时1毫升的流速吸取150微升细菌溶液,直至微流控通道被细菌培养液完全填充。然后,小心移除培养基注射器滤器,并将出口置于废液容器中。让细菌细胞在微流控通道内处于无流动条件下静置3小时,使其在多孔介质表面附着。
开始实验时,先将注射泵设定至所需流速以启动流动,然后以1赫兹频率开始记录压力读数,再以所需的时间间隔、光学配置和放大倍数采集生物膜生长过程的图像。