为什么在靶点验证中的单细胞分离需要关注零假设检验？

零假设检验可确保分离的单细胞与对照组之间的分子差异具有统计学显著性，从而支持可靠的目标验证，并减少早期发现中的假阳性结果。

自变量隔离如何融入显微操作工作流程？

显微操作技术能够精确分离单个细胞作为独立变量，从而实现对下游分析的精确控制，并在发现阶段的实验中最大限度地减少混杂因素。

单细胞捕获后，定量因变量测量能够实现什么？

对分离的单个细胞进行基因组或分子输出的定量测量，能够实现细胞表型的高分辨率比较，从而提供机制性见解并指导靶点优先排序。

为何在跨功能单细胞研究中，重复性要求至关重要？

重复实验可确保单细胞分离及下游分析在不同团队间具有可重复性，从而支持数据的可靠性，并促进研发流程中的协作决策。

在实施单细胞显微操作之前，需要具备哪些统计分析能力？

需要进行稳健的统计分析，以解读单细胞数据、评估变异性并验证研究结果，确保实施过程能够为产品组合的推进提供可操作的见解。

使用显微操作进行单细胞取样：一种从癌细胞悬液中分离单个细胞的技术

JoVE Encyclopedia of Experiments

癌症研究

0 次观看 • 2:10 分钟 • April 30th, 2023

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单细胞取样能够从癌细胞悬液中分离出单个活细胞，用于后续分析。

从癌细胞悬液开始进行分离。将所需体积的细胞悬液转移至玻片上。静置玻片一段时间，以减少颗粒运动并使细胞沉降。

现在，将载玻片转移至配备有与微毛细管尖端相连的显微操作仪的显微镜下。这种高精度仪器可在显微水平上实现对样本中细胞的物理操作。

将微毛细管尖端移至单个目标细胞附近。通过施加负压，将目标细胞吸入微毛细管中。随后，立即将微毛细管直接转移至含有所需收集缓冲液的离心管中。

将微毛细管内的内容物推出，使捕获的单个细胞释放到缓冲液中。将分离出的活单细胞置于冰上保存，直至进一步分析。

进行显微操作时，将100微升细胞悬液全部转移至载玻片上。然后将载玻片置于配备显微操作仪的显微镜下，静置5分钟使细胞沉降。接着，在0.2毫升PCR管中加入2微升细胞裂解主混合液，并置于冰上。使用显微操作仪在1微升1×磷酸盐缓冲液中捕获单个细胞。

然后，将细胞直接转移至 2 微升的细胞裂解主混合液中。使用台式微量离心机以 2000 × g 短暂离心 3 秒，使液体聚集于离心管底部。