软组织样本的伊红染色:一种基于伊红的全小鼠肾脏染色方法,用于可视化特定组织微结构

0 次观看3:14 分钟 • July 8th, 2025

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为了在软组织微环境中实现细胞质特异性染色,获取新鲜收获的小鼠肾脏。用含有甲醛、冰醋酸和甲醇的固定液处理,并在低温下孵育。

甲醛穿透细胞,使蛋白质与蛋白质之间以及蛋白质与核酸之间发生交联。甲醇置换组织中的水并使蛋白质凝固。乙酸导致细胞内酸化和组织肿胀,从而抵消甲醇引起的组织收缩。

固定可使酶失活并稳定组织形态,以便后续染色。使用缓冲液去除多余的固定剂。将组织与伊红Y(一种酸性染料)孵育。

伊红可穿透固定后的细胞并进入细胞质。细胞质的酸性环境(由乙酸处理造成)可使细胞质蛋白的氨基最大程度地质子化。

伊红带有负电荷的功能基团,可与蛋白质的质子化基团发生静电相互作用,形成稳定的染料-蛋白质复合物,当其在细胞质中积累时可将细胞质染成粉红色。孵育后,将染色的肾脏切成小块,随后用梯度递增的乙醇进行组织脱水。

将肾脏组织包埋于石蜡中,使用切片机获取薄组织切片,随后进行脱蜡水化处理,以供显微镜分析。

未染色的细胞核在粉红色染色的细胞质背景下呈白色,可清晰显示肾脏微结构,例如近曲小管(由具刷状缘的上皮细胞构成)和集合管(由无刷状缘的扁平上皮细胞衬覆)。

首先固定软组织样本。取一个50毫升离心管,加入固定液,其中包含9.5毫升4%甲醛和0.5毫升冰醋酸。将软组织样本放入离心管中,于冰箱中冷藏固定24至72小时。

冷藏后,用 DPBS 溶液清洗软组织样本 1 小时。然后将样本置于 2 毫升伊红 Y 染色液中进行染色,并在水平摇床上孵育 24 小时。

第二天,小心地将软组织样本从样本容器中取出,并用纤维素纸巾去除多余的染色剂。将其置于锥形容器中,放置于乙醇蒸气相上方,用于储存和后续使用。

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最后更新:22 八月 2026