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可消化的碳水化合物是植物组织的非结构性成分,它们在植物生长和代谢过程中作为储备能源发挥作用。
为了定量非结构性碳水化合物,取定量的植物组织放入离心管中。向管中加入稀释的硫酸,并加热样品。加热时,硫酸将可消化碳水化合物中的多糖水解为其相应的单糖亚基。
冷却样品。离心试管,使未消化的植物材料沉淀,从而获得含有单糖的上清液。
将上清液吸出至新离心管中,加入苯酚溶液处理单糖,随后加入硫酸。涡旋混匀管内物质后进行孵育。
孵育过程中,硫酸将单糖脱水生成糠醛衍生物。这些糠醛衍生物与苯酚反应,产生黄色至金黄色的溶液。
在490纳米处通过光谱法测定黄色至金黄色溶液的吸光度,该吸光度对应于植物样品中的碳水化合物含量。
接下来,取不同浓度的葡萄糖溶液,重复进行苯酚-硫酸处理,以产生不同的颜色强度,并绘制标准曲线。将未知碳水化合物样品的吸光度值与葡萄糖标准曲线进行比较,从而获得植物组织中可消化碳水化合物的含量。
首先,从每个组织样品中称取若干份,分别放入玻璃15毫升离心管中。标记各离心管,并记录每份样品的精确质量。
接下来,向每支试管中加入 1 毫升 0.1 摩尔的硫酸,并 tightly 拧紧管盖。然后,将试管置于沸水浴中加热 1 小时。
将试管转移至温水中冷却。随后,将试管中的内容物倒入已标记的1.5毫升微量离心管中。接着,在15,000 g 条件下离心10分钟。使用微量移液器将上清液转移至新的已标记1.5毫升离心管中。
使用移液器将每种未知样品各15微升转移至各自的试管中。然后,向每支试管中加入385微升蒸馏水。
在通风橱中,向每个标准品和待测样品的试管中加入 400 微升 5% 苯酚溶液。随后立即向每支试管中加入 2 毫升硫酸。
务必将硫酸加入溶液表面。
将试管孵育10分钟后,涡旋振荡试管。然后,再将试管孵育额外30分钟。
从每个样品管中转移800微升至三个聚苯乙烯1.5毫升半微量比色皿中。然后将分光光度计设置为在490纳米波长下读数,并使用空白比色皿进行校准。
最后,将每个比色皿放入分光光度计中测定,并记录吸光度。