为何设定上下聚焦边界对靶点验证至关重要？

定义上下焦平面边界可确保在不同样本间进行一致的z轴范围采集，从而实现对神经元形态和投射密度的可靠比较，这对于评估临床前模型中的靶点参与至关重要。

分离自变量（染色方法）如何提高发现流程的可靠性？

采用高尔基-考克斯染色作为标准化的独立变量，可使研究人员分离其对神经元可视化的影响，减少混杂因素，并在跨研究比较实验条件时提高可重复性。

哪些定量因变量测量可用于先导化合物的鉴定？

通过图像堆栈获得的神经突长度、分支频率和Sholl分析等测量指标，可提供客观且可量化的终点数据，从而支持基于化合物对神经元结构和连接性影响的先导化合物排序。

为何复制要求对跨职能协作至关重要？

在多个位置进行具有足够重叠区域的成像重复，可确保数据的一致性和稳健性，从而使组织学、成像和数据分析团队能够在不同项目间使用标准化且可比较的数据集开展工作。

在实施此成像方法之前，需要具备哪些统计分析能力？

研究团队需要具备进行定量形态测量分析的能力，包括在不同条件下对神经突参数进行统计学比较，以确定化合物处理或基因操作后神经元结构发生的显著变化。

使用高尔基-考克斯金属染色法对小鼠脑切片中神经元进行显微成像

JoVE Encyclopedia of Experiments

神经科学

0 次观看 • 2:37 分钟 • April 28th, 2025

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从一块经高尔基-考克斯（Golgi-Cox）溶液染色以选择性加深神经元、并经焦油紫（cresyl violet）复染以突出脑区的厚脑切片开始。

将它们置于已用透明剂预处理过的载玻片上，以增强组织透明度。

将玻片置于显微镜载物台上，滴加硅油，并降低物镜直至其接触油滴。

硅油的折射率与物镜和载玻片相匹配，从而实现精细成像。

聚焦样品，然后调整相机的曝光和白平衡，以获得最佳图像质量。

聚焦于上层以设定上边界，然后聚焦于下层以设定下边界。

调整图像之间的间距，确保有足够的重叠以捕获神经元投射的细节。

在不同位置重复成像以捕获感兴趣区域，然后将这些图像叠加，构建神经元的三维表征。

为了获取包含目标神经元区域的高分辨率图像序列，首先在显微镜上选择一个30倍、数值孔径（NA）为1.05的硅油浸入式物镜。然后，在载玻片上滴加3至4滴硅油浸油。将物镜置于载玻片上方，确保物镜与油滴接触。调焦图像，并调整成像软件中的相机设置，包括曝光和白平衡。接下来，在图像采集窗口中，通过将焦点调至切片顶部，然后点击设定，以设置图像序列的上边界。

然后聚焦到切片底部，并在图像采集窗口中选择“设置为堆栈底部”。在“图像间距离”处输入 1 微米，将步进距离设为 1 微米。最后，在图像采集窗口中选择“采集图像堆栈”以获取图像堆栈。重复上述步骤，以采集整个感兴趣区域，确保所有图像堆栈在 x 轴和 y 轴方向上至少重叠 10%。