星形胶质细胞区室特异性动态的自发钙成像

0 次观看2:33 分钟 • June 17th, 2025

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将含有神经元-星形胶质细胞共培养物的聚合物包被盖玻片放入记录室中。

这些转染的细胞在质膜和内质网膜上表达钙敏感蛋白,当钙结合时发出荧光,以追踪亚细胞水平的钙动态。

加入含有钙离子的培养基,并盖上培养 chamber 以防止蒸发。

将培养皿置于荧光显微镜下。

钙离子与钙敏感蛋白结合。在蓝光照射下,内质网外膜上的钙敏感蛋白会发出绿色荧光。利用这种绿色荧光来定位星形胶质细胞。

接下来,用绿光照射。细胞膜上的钙敏感蛋白会发出红色荧光。确认在呈现绿色荧光的同一星形胶质细胞中存在红色荧光。

首先记录质膜上钙敏感蛋白的时间推移图像,然后记录内质网外膜上钙敏感蛋白的时间推移图像。

分析图像,观察所选星形胶质细胞中特定区室的自发性钙活动。

将转染了 Lck-RCaMP2 和 OER-GCaMP6f 的细胞的盖玻片安装到显微镜的记录腔室中。加入 400 µL 成像培养基,并在腔室上方加盖盖板。选择适用于 GCaMP6f 的滤光片组和光源。找到表达 OER-GCaMP6f 的星形胶质细胞。

接下来,为 RCaMP2 选择合适的滤光片组和光源,并确认 Lck-RCaMP2 是否在相同的星形胶质细胞中表达。以每秒 2 赫兹的速率记录 Lck-RCaMP2 持续两分钟的时间序列图像,并保存成像数据。

此调整完成后,将滤光片组重新设为适用于 GCaMP6f 的设置。以每秒2帧的速率对 OER-GCaMP6f 进行为期两分钟的延时成像。然后保存成像数据。

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最后更新:22 八月 2026