2018年3月6日
本文展示了在生物样本库项目中,为猪动物模型生成代表性组织样本的各种方法的实际应用与性能,这些方法适用于广泛的下游分析,包括体积测定、系统性随机取样,以及针对定性和定量形态学与分子分析类型的组织样本差异处理。
本视频展示了用于采集和处理生物样本库猪组织标本的两种关键技术。浸没法可可靠地估算器官和组织的总体积,而定向切片法(orientator法)则可生成随机且各向同性的组织切片,用于无偏估计定量形态学参数。浸没法在测定组织密度方面的主要优势在于,该方法适用于任何类型的组织,并且对小样本和大样本均能产生可靠的结果。
取向器技术的优点在于其高效性,并且适用于大组织样本。要开始对大型器官进行体积测定,需从器官上切取适当大小的组织块。用纸巾小心擦拭样本,以去除多余的血液和组织液。
然后使用精密天平称量样品,并记录样品重量。向一个合适大小的烧杯中加入0.9%生理盐水。不要将烧杯完全装满,以防止组织浸入时溢出。
将烧杯放在天平上,然后将镊子或自制的样品支架浸入生理盐水中,直至镊子或样品支架上的标记达到液面位置。接着,将天平显示归零。小心地将组织样品固定在镊子或样品支架上,并将样品完全浸入生理盐水中,直至达到标记位置。
为了获得可靠的密度测量结果,必须确保样品完全浸没,并避免浸没的样品与烧杯内壁或底部接触。在固定样品位置的同时,记录天平上显示的重量。利用该测量值及室温下生理盐水的密度,计算样品的体积。
然后根据样品的质量和体积计算组织样本的密度。对于较大的器官和组织(如本例中的肾脏),需使用多个样本进行重复测量,并根据单次测量结果计算平均密度。对于总体测量的小样本或小器官(如垂体),在根据单次测量值计算器官平均密度之前,应重复测量三次。
最后,根据器官、组织或器官亚结构的重量和密度计算其总体积。将固定好的组织样本放置在等角圆的打印图上,使其一边与0至180度的方向平行,然后使用随机数字表确定一个随机角度。
在等角圆的刻度上找到对应的标记。利用这些标记,沿等角圆刻度所示随机角度的方向,并垂直于样品的放置表面,对样品进行切面切割。将组织块的切面朝下放置在余弦加权圆上。
将静止表面的边缘与一对一方向平行放置。现在使用随机数表确定一个随机角度,通过该角度在样品上切割一个新的切面。所得的切面即为各向同性均匀随机切面。
本表展示了利用浸没法测定的多种猪组织和器官的代表性密度。大多数猪组织的密度值略高于1,即高于水的密度。而某些在生理盐水中漂浮的组织,例如脂肪组织,其密度则低于1。
该图显示了使用取向器技术制备的猪左心室心肌的四个代表性等距无偏区域(IUR)切面。请注意不同IUR切面中切割角度的变化。一旦掌握,组织密度测定的浸没法可在数分钟内完成。
如果操作得当,使用定向切片法(orientator technique)生成的各向同性均匀随机组织切片适用于通过适当的体视学分析方法来估计任何定量的形态学参数。数字音乐。
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本视频展示了采集和处理生物样本库猪组织标本的两种关键技术。浸没法用于估算器官和组织的总体积,而定向切片法可生成随机且各向同性的组织切片,用于无偏定量形态学分析。
猪源生物样本库组织的标准化采样与处理直接影响生物制药研发中临床前模型的可重复性和转化价值。来自有限且高价值动物模型的可靠体积和形态学数据,能够实现稳健的跨研究比较,并增强早期发现阶段的预测可信度。这些经过验证的技术通过确保样本质量,为后续分子和定量分析提供支持,从而支撑产品管线的决策制定。
这些采样和处理方法使猪源生物样本库组织成为从早期发现到临床前研究的基础资源,支持假设验证、检测方法开发以及转化医学研究。