部分肝叶切除术：一种用于研究肝脏形态学再生的手术模型

该手术操作的总体目标是通过部分肝叶切除术诱导肝脏形态学再生。该方法可解答干细胞生物学和再生医学领域中关于肝脏形态学再生及肝脏特异性干细胞的关键问题。该技术的主要优势在于其微创性，且无需化学损伤或电灼处理。

在接触动物之前，先将母鼠笼中的垫料擦拭到手套上。然后将所有幼鼠及部分母鼠笼中的垫料转移到一个置于加热垫上的空笼中。接着，将一只幼鼠放置在解剖显微镜下。

通过脚趾夹捏无反应确认达到适当的镇静水平后，使用一小块纱布用聚维酮碘对动物的后腹壁进行消毒。使用显微外科剪刀和镊子在肋缘下方左侧锁骨中线处做一个约半厘米的切口。用镊子轻轻分离皮肤。

然后在腹膜腔内做第二个较深的切口，使用显微解剖剪和镊子的钝背边缘，对腹部两侧施加轻柔的侧向压力，使左叶的尖端从腹膜腔中突出。当左叶的左尖端可见时，从该叶切除适当实验量的组织，并将组织放入盛有预冷 PBS 的 1.5 毫升离心管中，置于冰上。用一块卷好的纱布轻轻将左叶推回腹膜腔内。

当出血停止后，移除纱布，并用浸有PBS的纱布湿润手术部位及周围区域。使用缝线和连续缝合关闭手术切口。然后用浸有PBS的纱布轻轻而彻底地滚动覆盖幼崽及伤口部位，确保无血液或聚维酮碘残留。

将幼鼠置于接触过母鼠粪便和尿液的纱布垫附近使其恢复。当所有幼鼠完成肝切除后，将所有幼鼠及其垫料放回母鼠的笼子中。称重肝叶后，于室温下用2%多聚甲醛固定组织样本1小时。

固定结束后，将组织转移至含有最佳切割温度介质的独立冷冻模具中，置于干冰上冷冻。使用任何标准冷冻切片机获取每个叶的 7–10 微米切片。术后至少连续 56 天每天检查仔鼠，确认其伤口保持闭合，并在手术后 24 和 48 小时注射镇痛剂。

在适当的实验终点，从板上的每只幼鼠中取出肝脏并称重。然后在近端附着处仔细分离各个肝叶，并将切除的左叶质量与整个肝脏质量进行比较，以确定每个肝叶的再生程度。术后7-14天可观察到左叶的轻微再生，通常在56天后可观察到完全再生。

组织学分析显示，再生肝脏中的肝细胞区域无显著差异。此外，对新生小鼠注射EdU的结果表明，与未损伤的对照组相比，受损并处于再生状态的左叶中增殖细胞数量显著增加，提示细胞增殖参与了新生小鼠左叶的再生过程。然而，在出生后第14天的幼年小鼠中进行肝切除后，左叶的再生能力下降，而未损伤肝叶的代偿作用增强。

这表明，在14天时，机体对急性切除的损伤反应已从叶特异性再生转变为全局性代偿。一旦掌握，若操作得当，该技术可在15分钟内完成。在实施该操作过程中，应尽可能小心谨慎，以避免对母鼠或幼鼠造成额外应激。

完成此操作后，还可采用其他方法，如连续肝切除术或慢性肝损伤模型，以进一步评估肝脏的再生潜能。该技术建立后，为干细胞生物学领域的研究人员探索新生小鼠肝脏再生开辟了道路。观看本视频后，您应能够充分掌握如何完成新生小鼠肝脏的叶段特异性可控截除手术。

请注意，使用异氟烷具有极高的危险性，进行此操作时必须采取防护措施，例如佩戴面罩和手套。