探讨间充质干细胞片对肝细胞癌发展的影响潜力 体内

您好，我是来自阿卜杜拉国王国际医学研究中心干细胞与再生医学科的Dr. Alaa Alshareeda。今天我们将通过细胞膜片技术，演示间充质干细胞对大鼠模型中肝细胞癌发展的影响。您好，我是Abdullah Almubarak。

我正在沙特国王大学的实验外科与动物实验室工作。我们使用裸鼠以避免细胞片移植后发生任何排斥反应。此图展示了在裸鼠上进行细胞片移植的步骤。

本研究将使用 8 至 12 周龄的裸鼠。首先，对裸鼠进行切口处理，使用手术刀在皮肤与下方肌肉之间做一个 7 至 10 厘米的切口，以暴露肝脏。为转移细胞膜片，使用无菌膜。

将膜置于细胞层上以收集细胞层。然后，将带有膜的细胞层放置于肝脏的一个叶上。细胞层构建。

在接种细胞前，使用未稀释的胎牛血清（FBS）包被3.5厘米温敏性UpCell培养皿。用FBS包被培养皿有助于细胞在膜层中的生长，并防止细胞降解。确保完全覆盖培养皿的所有表面。

将培养皿置于含5%二氧化碳和95%空气的湿润环境中，37摄氏度孵育24小时。次日，去除多余的胎牛血清（FBS），并将培养皿在室温下干燥至少一小时。将至少一百万个HepG2癌细胞单独或与间充质干细胞共培养接种至DMEM培养基中。

培养基中添加10% FBS和1%青霉素-链霉素。本研究中癌细胞与间充质干细胞的比例为4:1。加入细胞后，轻轻摇动培养皿。

将细胞置于含5%二氧化碳和95%空气的湿润环境中，37摄氏度培养。细胞片的脱离：当细胞融合度达到100%时，将培养皿从37摄氏度的培养箱中取出。

现在，将HepG2癌细胞片在室温下孵育1小时，同时将HepG2与间充质干细胞共培养物置于含5%二氧化碳和95%空气的湿润环境中，在20摄氏度下孵育30至40分钟。在细胞片脱离孵育期间，开始动物实验操作。所有动物研究均经沙特国王大学伦理委员会批准。

进行手术操作。通过测试足底回缩反射来检查麻醉深度。使用碘伏对手术区域进行消毒。

现在，用碘再次进行第二次擦洗。用无菌手术巾覆盖动物体表，以避免切口污染。使用无菌手术刀在皮肤与下方肌肉之间做一个长约7至10厘米的切口，以暴露肝脏。

用手术刀的钝背边缘将腹肌与皮肤分离。使用手术刀小心刺入白线，并用锐利的剪刀延长切口。将细胞片移植到大鼠肝脏上。

轻轻敲击培养皿底部，使细胞片从表面脱落。通过半圆形刮擦细胞片边缘，将细胞片与培养皿表面分离。然后，轻柔地将所有培养基从培养皿中移除。

确保膜片完整无损，否则无法使用。准备无菌膜以收获和转移细胞膜片。首先，用生理盐水浸润膜片，然后用无菌棉签去除多余的盐水。

将湿润的膜置于细胞层上方，注意避免膜与细胞层之间产生气泡。在膜和细胞层上滴加少量生理盐水，以收集材料。静置数秒，确保细胞层已牢固附着于膜上，然后进行收集。

现在，准备进行肝脏移植。确保肝脏表面干燥。将带有细胞片的膜覆盖在大鼠肝脏的单个叶上。

加入几滴无菌生理盐水，使细胞层从膜上脱落。等待五分钟，然后小心地移除膜。在此视频中，可见细胞层已附着在肝脏上。

最后，用五针尼龙缝线缝合深层肌肉和皮肤切口。缝合切口后，用碘伏对术区进行消毒。从停止麻醉到动物抬头的时间因个体而异，通常在5至20分钟之间。结果。

该图显示了移植 HepG2 细胞片一个月后大鼠肝脏上形成的肿瘤。此处的肿瘤是由 HepG2 癌细胞与骨髓间充质干细胞构建的细胞片移植后形成的。而该图显示的是由 HepG2 癌细胞与脐带间充质干细胞构建的细胞片移植后，大鼠肝脏上形成的最小肿瘤。该图显示了细胞片移植一个月后大鼠肝脏的 H 和 E 染色结果。

其中 A 代表正常大鼠肝细胞，B 显示癌变大鼠肝细胞。结论：通过观看本视频，您应能够利用细胞膜片技术在裸鼠上建立肝细胞癌模型。感谢观看。