2018年11月9日
本实验方案的目的是测量大鼠膝关节的伸展活动范围。可通过该方法量化各种增加膝关节僵硬程度的疾病的影响以及治疗措施的有效性。
该方法有助于回答肌肉骨骼领域中的关键问题,例如利用大鼠模型研究干预措施对膝关节活动范围的影响。该技术的主要优势在于,它提供了一种精确、可重复且不受操作者影响的大鼠膝关节伸展测量方法。首先使用剪刀和镊子去除已处死大鼠下肢的皮肤,暴露并清除皮下筋膜组织。
然后,将身体侧放,使实验侧的腿朝上。将股骨置于关节测量仪固定平台中集成的带槽金属夹具内。使用精密螺丝刀穿过肌肉打孔,将夹具固定在大转子远端,以固定股骨。
然后,将股骨外侧髁调整至关节测量仪旋转中心上方。将带有两个直立柱的可动臂置于小腿后方,位于跟骨近端稍上方,以便在电动机启动后推动膝关节进入被动伸展状态。使用六角扳手拧紧股骨夹具底部的固定螺钉,直至夹具牢固固定。
使用螺丝刀确保相机正确安装在关节测量仪上。检查相机是否设置为手动对焦,并将相机对焦于股骨髁。根据所测试膝关节活动范围的方向及大鼠的位置,将关节测量仪的方向设置为顺时针或逆时针。
通过同时按下电源按钮和启动按钮来激活关节测量仪电机。关节测量仪电机将以6.6 rpm的速度转动,当达到第一个预设扭矩时,停止2.1秒。当达到第一个扭矩时,相应的LED灯将亮起,数码相机将自动拍摄膝关节图像。
拍摄完图像后,关节测量仪将继续施加下一个更高预设的扭矩。当四个扭矩全部施加完毕后,关节测量仪将停止工作。一旦大鼠被放置在关节测量仪上并启动测试,完成一只膝关节的测试总时间约为18.8秒。
为了分离挛缩中的关节源性或非肌性成分,需重置扭矩序列以释放施加在腿部的力,然后切断膝关节后侧跨关节的肌肉。解剖肌肉时应足够靠近膝关节近端,以确保不损伤关节囊。在肌腱切断术前后分别对两条腿进行测试,并剔除所有需要的组织后,应按照机构规程处理动物尸体及所有生物危害性材料,并清洁关节测量仪。
在 Image J 中打开由安装在关节测量仪上的相机拍摄的数字图像文件。进行分析的人员应对动物的实验分组情况设盲。从主工具栏中选择角度工具,通过从股骨夹持器中点向股骨外侧髁绘制一条股骨线,再从股骨外侧髁向外踝绘制一条胫骨线,以描记股骨-胫骨角。然后点击“分析”菜单中的“测量”工具,显示由上述两条线计算得出的角度值。
采用0度表示完全伸展的惯例。该图显示了7只大鼠在膝关节固定16周后,与未固定的对侧肢体相比的最大膝关节伸展程度。对于被固定的膝关节,其最大伸展能力较对侧有所降低。
肌腱切断术后,实验侧和对侧膝关节的最大伸展能力均有所增加,但实验侧膝关节仍表现出屈曲挛缩。在实施该操作时,重要的是确保股骨夹固定牢固,以避免测试过程中膝关节移动。在完成该操作后,可进一步采用其他方法,如对膝关节和关节结构进行组织学分析,以探讨与膝关节组织和细胞变化相关的其他问题,这些变化会影响关节的活动范围。
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本方案旨在测量大鼠膝关节的伸展活动范围,从而量化导致膝关节僵硬的疾病影响以及治疗措施的有效性。
量化特定组织对关节挛缩的贡献,有助于在肌肉骨骼靶点验证中降低机制性风险。该方法通过在具有疾病相关性的大鼠模型中分离关节源性和肌源性屈曲挛缩成分,提高预测可信度。该方法为评估影响膝关节活动范围的干预措施提供了标准化、可重复的检测手段,可为临床前研究项目的早期决策提供依据。
该方法适用于从发现到临床前研究的连续过程,可在早期发现阶段支持假设验证,并在转化研究中实现机制性后续分析。