通过逆行注射牛磺胆酸钠至胆胰管建立小鼠重症急性胰腺炎模型

本视频的总体目标是通过逆行注射牛磺胆酸钠至胆胰管，建立急性胰腺炎的小鼠模型。所有涉及动物的实验均经苏州大学动物伦理委员会批准。所有外科手术均在全身麻醉下进行。

未使用镇痛药，以免干扰疾病的自然病程，此做法已有先前文献支持，并经苏州大学动物伦理委员会批准。术前将小鼠禁食8至12小时。通过0.22微米滤器制备5%牛磺胆酸钠溶液。

将手术器械和材料（包括镊子、剪刀、刀片架、持针器、止血夹、血管夹和无菌手术单）进行高压灭菌。微型注射器通过辐照灭菌。对小鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠溶液，剂量为每公斤体重50毫克，以诱导全身麻醉。

用胶带将小鼠固定在辐照过的泡沫平板上，呈仰卧位。使用脱毛膏去除小鼠从剑突水平至双侧髂前上棘连线区域的毛发，左右两侧平行于腋前线。用0.5%碘伏擦拭皮肤两到三次，每次擦拭后静置干燥一到两分钟。

用无菌手术巾覆盖小鼠。切开皮肤层，然后皮下分离。沿腹部正中做长约2至3厘米的切口。

从胃部由左至右定位十二指肠。使用手术镊和浸有消毒剂的棉签轻轻将十二指肠拉出并移向左侧，以暴露胰腺、胆胰管和十二指肠乳头。用8-0缝线穿过十二指肠与胰腺在乳头周围的连接处，将缝线拉至小鼠身体左侧，以固定十二指肠。

轻轻牵拉皮肤和肝脏下缘。夹闭肝总管。将微量注射器逆向穿刺至远端胆胰管。

用钳子将针尖固定在十二指肠乳头附近。以每分钟 5 微升的速度向胆胰管内注入 10 微升 5% 牛磺胆酸钠溶液。保持胆胰管闭合 5 分钟，以维持稳定的压力。

移除夹钳。拔出显微注射器，取下另一个夹钳并固定缝线。将十二指肠恢复至原始解剖位置，并检查有无出血。

使用6-0缝线缝合伤口。移除无菌巾。用0.5%碘伏消毒切口。

将动物置于37摄氏度的加热垫上恢复麻醉。皮下注射0.8毫升0.9%生理盐水以补充液体。术后24小时，采用相同剂量和注射途径，用戊巴比妥钠对小鼠进行麻醉。

从腹主动脉采集全血，于1,500 × g离心15分钟，分离血清用于血清学检测。采集胰腺和肺组织用于组织学评估。将胰腺浸入4%多聚甲醛溶液中固定24小时。

用一系列浓度的酒精进行脱水，并用石蜡包埋。使用切片机制备5 µm厚的胰腺组织切片。进行苏木精-伊红（H&E）染色，以对胰腺进行组织学评估。

与术前相比，小鼠在术后24小时表现出轻微的活动减少并伴有体重下降。在术后72小时，对照组小鼠和SAP小鼠的存活率分别为100%和72.7%。根据胰腺组织切片的H&E染色结果，可在SAP小鼠中观察到胰腺组织的腺泡坏死，而在对照组小鼠中未发现明显改变。

此外，与对照组小鼠相比，SAP 小鼠中淀粉酶、脂肪酶、胰腺和肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性显著升高。同时，肝肾功能指标包括丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、血尿素氮（BUN）和肌酐水平也显著升高。通过逆行注射牛磺胆酸钠至胆胰管，可在小鼠中成功诱导重症急性胰腺炎。

充分暴露胆胰管以确保穿刺成功。穿刺过程中应注意保持适当的角度和力度，避免穿透胆胰管。本文所述的TC诱导SAP模型是研究重症急性胰腺炎发病机制的适宜模型。

该模型采用成本较低的试剂，具有经济性，且本视频有助于更快地培训新手外科医生。