通过电凝法建立的梗阻性慢性胰腺炎模型

建立慢性胰腺炎动物模型的方法有很多，包括腹腔注射钠盐以及胰管结扎法，但这些方法均存在一定的局限性。我们团队近期开发了一种新的小鼠慢性胰腺炎电凝模型，其优势在于无需长期给药或掌握复杂的技术，操作简便，可轻松建立慢性胰腺炎模型。

采用电凝法诱导小鼠慢性胰腺炎提供了一种更为便捷的实验模型，为该领域的未来研究提供了有前景的途径。首先，将麻醉后的小鼠置于加热垫上以维持体温。使用剃毛器剃除胸部至下腹部之间的毛发。

接下来，使用剪刀在腹部中央做一处两厘米长的切口，随后在上腹部与剑突之间做一处一厘米长的切口。使用腹腔扩张器定位胰腺区域以进行电凝。用无菌棉签从左上腹后方辨认十二指肠，并将其翻转以观察连接肝脏的胆管。

使用微血管夹暂时阻断近端胆总管，以防止液体反流入肝脏。将外径0.25毫米、内径0.35毫米的聚乙烯导管连接至0.25毫米的针头上，穿刺乳头周围区域，目标为十二指肠大乳头。将导管插入乳头并送入胆总管约一半长度后，停止继续插入。

启动输液泵，输注0.2%亚甲蓝溶液，直至胰管变为蓝色。输注完成后，拔出聚乙烯管并移除微血管夹。使用无菌棉签固定胰腺，并将电凝刀对准染成蓝色的区域。

设定电凝参数后，使用纯铜作为电极材料，在避开血管的情况下对胰腺进行2至3秒的处理。持续进行电凝，直至亚甲蓝染色区域变为黄色或棕色。当胰腺内不再可见蓝色染色液时，停止电凝操作。

手术后，将小鼠置于内衬垫料的聚乙烯盒中。胰管电凝后，对小鼠进行麻醉，并将其放置于手术平台上。通过眶后静脉丛采血时，轻轻牵拉背部皮肤，使眼球轻微突出。

然后，将毛细管的一端置于眼角处，以30至45度的角度轻轻插入眼球下方。旋转毛细管，直至血液开始流出。采血完成后，用纱布轻压眼睑使其闭合。

在1,200 ×g条件下离心血液15分钟，收集上清液至新离心管中。使用市售试剂盒按照生产商推荐的方法测定淀粉酶、胆红素和透明质酸的含量。随后，将已处死的小鼠置于设定为4°C的手术台上。

使用剪刀和镊子在腹壁上做 V 形切口，以暴露腹腔。取出胰腺并将其分为三部分用于染色。将胰腺固定于 4% 多聚甲醛溶液中，然后将固定的胰腺包埋于石蜡中以进行切片。

将石蜡块切成0.5毫米厚的切片，并使用苏木精-伊红染色以及马松染色进行免疫组织化学分析。在光学显微镜下观察染色后的胰腺组织。苏木精-伊红染色显示，在电凝组术后第14天可见散在的胰腺腺泡细胞以及慢性胰腺炎的证据。

第28天，观察到胰腺腺泡细胞的组织恢复及病理改变逆转的迹象。Masson染色显示，与假手术组相比，电凝组存在显著更多的纤维化。免疫组织化学染色显示，电凝组的I型胶原α1和α-平滑肌肌动蛋白水平升高，提示慢性胰腺炎程度更高。

电凝组的透明质酸水平升高，在第21天左右达到峰值，而假手术组则保持稳定。电凝组的胆红素水平在第14天显著上升，并在第21天左右达到峰值，而假手术组未见变化。电凝组的淀粉酶水平在第14天急剧升高，随后至第28天下降，而假手术组变化不大。