光学相干断层扫描在小鼠视网膜病变模型中的应用

光学相干断层扫描广泛用于不同视网膜疾病的临床诊断，但在小鼠模型中的应用仍具挑战性。本方案描述了如何在动物中实施OCT技术。该技术可应用于眼球大小不同的动物。

它能够实现无创、高分辨率和实时的视网膜横断面成像，并可对视网膜厚度进行定量测量。光学相干断层扫描（OCT）通过识别病变的位置、范围、形状和大小等特征，以及所有可疑的视网膜异常（如视网膜新生血管），辅助视网膜病变的诊断。该方案适用于动物研究或眼底疾病，包括视网膜疾病。

开始操作前，应做好准备并逐步遵循实验方案。在动物麻醉状态下进行实验。经过一定练习后，应能够获得高质量的OCT图像。

首先，打开计算机并启动软件。点击测试程序按钮以完成测试程序。然后，打开恒温器并将其预热至 37 摄氏度。

程序测试完成后，启动OCT模块操作。创建新受试对象并填写小鼠信息。然后，预热电热毯并用手术巾覆盖。

将麻醉后的小鼠置于电热毯平台上，并立即在双眼上涂抹医用透明质酸钠凝胶。接着，将一枚100D的接触镜置于小鼠角膜上，凹面朝下，与角膜表面的透明质酸钠凝胶接触。然后，将小鼠放置于cSLO设备的小型恒温动物平台上。

使用镊子调整隐形眼镜的角度，使瞳孔位于镜片中心。微调头部位置，使眼睛正对前方。点击OCT按钮，选择小鼠模块，然后启动cSLO程序。

然后，使用操作杆缓慢移动预设镜头，使其靠近接触镜。进一步调整，以对齐前后极的图像，并将其居中于视神经乳头处。接着，启动OCT程序，并上下点击进度条，直至OCT图像出现。

将最小范围调整至0到20之间，最大范围调整至40到60之间。然后调节预设的镜头距离和位置方向，直至获得理想的OCT图像。通过移动cSLO中的标准线来选择扫描位置。

然后，点击“平均”以叠加cSLO和OCT图像信号，并点击拍摄按钮以获取SLO-OCT图像。实验结束后，取下100D接触镜，并涂抹左氧氟沙星眼用凝胶以保护角膜。对于视网膜分层校正，在OCT界面点击“加载检查”，并通过弹出窗口调用OCT图像。

然后，双击媒体容器中的图像，将其显示在屏幕上。接着，点击层检测，以完成视网膜的自动分层。在选定待分析层面两侧的分界线后，点击编辑层以调整间距和限定范围。

然后，通过移动红色圆圈来调整线条。要测量视网膜分层厚度，请点击测量标记按钮，并选择待分析层的分界线，以在OCT图像上显示该层的边界。接着，选择“与层连接”并勾选移动时保持连接。

接下来，选择用于显示结果的区域，然后在OCT图像上点击待分析的位置，以显示测量线。点击下一列以进行后续测量并显示先前的数据。要测量全视网膜厚度，请在右上角列表中选择第一条线和第七条线。

然后，根据视乳头边缘处视网膜结构的形态，在水平标尺上以200 µm为间隔测量四个数值。C57BL/6小鼠的OCT图像显示了具有清晰分界的多种视网膜层次。相比之下，Vldlr基因敲除小鼠则显示出异常的高反射性病灶。

OCT 图像显示，Vldlr 基因敲除小鼠的视网膜表面存在一些中等反射带。这些条带附着于视网膜血管，与不完全玻璃体脱离的 OCT 特征相符。在视网膜下腔出现一处高反射病灶，并延伸至外核层，但未突破外丛状层。

该病灶的OCT表现与病理学结果一致。病理切片显示，新生血管穿透视网膜色素上皮层、光感受器内-外节以及外界膜，侵入外核层，但未累及外丛状层。另一条高反射病灶位于视网膜下间隙，未累及外核层。

与病理学发现一致，这种视网膜下新生血管未穿透外部限制膜。比较两组小鼠后极部颞侧、鼻侧、上方和下方区域右眼的视网膜厚度，结果显示 Vldlr 基因敲除小鼠的视网膜厚度显著低于 C57BL/6J 小鼠。在执行该方案时，应将一个100D的接触镜正确放置于角膜上，然后调整图像位置。

选择扫描位置并在拍摄前叠加图像。按照此操作步骤，可进行眼前节OCT检查，需调整预设镜头与角膜之间的距离。该方法能够显示角膜、前房、虹膜、睫状体以及晶状体。

该技术为小型动物模型中的视网膜病变研究提供了重要工具，有助于在基础研究中实现视网膜病变的无创检测与定量分析。