日本脑炎疫苗接种儿童中淋巴细胞检测的流式细胞仪跨实验室标准化

流式细胞仪的标准化方法为实验室结果之间的相互认可提供了可行途径，并确保了多中心研究项目中结果的一致性。该方法耗时少、易于操作，可配备自动化分析模板，显著降低数据分析的需求。首先，在转出实验室的细胞仪A软件中，通过点击细胞仪按钮并选择查看配置，开始创建新的配置。

在配置列表中右键单击基础配置文件夹，选择新建文件夹并重命名。接下来，通过右键单击基础配置并复制来创建新配置。右键单击新文件夹，将基础配置粘贴进去，然后重命名新配置为“标准化方法转移”。从参数列表中将参数名称（例如 FETC）拖动到相应的检测器 530/30 上，并为新配置编辑其他附加参数。

为了在转移实验室中标准化实验，使用该流式细胞仪A的设置运行性能检查，并检测微球以确认流式细胞仪A运行良好。在软件浏览器窗口中右键单击流式细胞仪A的设置，通过选择应用设置创建一个工作表。然后使用未染色样本调节前向散射区域（FSC）和侧向散射区域（SSC）以及所有荧光参数的光电倍增管（PMT）电压。

通过右键单击实验流式细胞仪设置并选择应用设置，保存应用程序设置。要自动添加补偿对照，请单击实验按钮，选择补偿设置菜单，然后选择创建补偿对照。记录所有补偿对照微球的数据。

完成后，点击实验并选择补偿设置，自动计算补偿值，然后记录单细胞染色对照的数据。使用 CD45 RAA APC 将 R7-18 的补偿值调整为 15%APC，使用 CD19 BB700 将 APC H7 的补偿值调整为 14%BB700，使用 CD8 R7-18 将 APC H7 的补偿值调整为 60%R7-18。记录 CST 微球的数据后，创建 CST 明亮微球目标值模板的全局工作表。完成后，在流式细胞仪阵列上运行样本，并收集 25,000 个淋巴细胞。

为样本创建分析模板的全局工作表，并将实验模板保存在A流式细胞仪上。使用CD-ROM导出A流式细胞仪的实验模板。为将实验模板转移至测试实验室的B流式细胞仪，需使用CST微球进行性能检测，以确认B流式细胞仪运行正常。从A流式细胞仪导入实验模板，并利用该模板为B流式细胞仪创建实验。

使用同一批次的 CST 磁珠，调整每个荧光通道的荧光参数电压，使其与先前的 MFI 仪器匹配。如有需要，使用未染色样本调整 FSC 电压。右键单击实验流式细胞仪设置，选择“应用设置”以保存应用设置。

接下来，使用 CD45 RA APC 将 R7-18 的补偿值调整为 15%APC。使用 CD19 BB700 将 APC H7 的补偿值调整为 24%BB700。并使用 CD8 R7-18 将 APC H7 的补偿值调整为 60%R7-18。

在调整补偿值后，使用流式细胞仪 B 运行样本，并收集 25,000 个淋巴细胞。在用于细胞仪设置与追踪（CST）荧光微球的目标值模板的全局工作表中，获得了 10 个荧光通道的直方图，每个参数的目标值通过直方图门控内的中位数显示。仪器标准化后，使用细胞仪 A 和 B 获得的样本散点图表明，通过自动分析模板，不同仪器之间的数据具有一致性。

当比较两种不同仪器型号的六个样本结果时，未观察到显著差异。使用标准化方法从不同仪器获得的15种淋巴细胞亚群结果显示出高度可比的数据。在本方案中，采用相同的配置名称、创建模板以及设定不同仪器中安全微球的ecotech值是关键步骤。