一种高效的单人操作实验室小鼠乳汁采集技术

本研究聚焦于改进哺乳期研究中的乳汁采样技术，特别是在小鼠中的应用。我们提出了一种方法，可克服样本损失、采样量有限以及操作繁琐等挑战，为啮齿类动物乳汁采集提供了一种简化的解决方案，成为该领域研究人员的有力工具。在小鼠研究中面临的主要挑战之一是其体型较小，尤其是在采集乳汁等生物液体时更为突出。

若不通过合并样本或由两人手动采集，则很难获得足够的采集量，这使得该过程在许多情况下不够实用。我们的方案通过使用 readily available 的实验工具，使单人可在 10 分钟内采集到足够的样本量，从而简化了乳汁采集流程。与其他方法不同，该方法采用持续负压吸引，将乳汁直接吸入收集管中，最大限度减少了样本损失，节省了时间，并保留了用于分析的样本体积。

首先，将内径为 5/32 英寸的 PVC 软管一端连接至真空泵，并用胶带固定连接处。使用带倒刺的直通接头，将内径为 5/32 英寸的 PVC 软管另一端连接至内径为 1/8 英寸的 PVC 软管。接着，使用接头将内径为 1/8 英寸的 PVC 软管另一端连接至一支 18 号规格的皮下注射针头。

使用剪刀剪去 P200 枪头末端约 0.2 厘米，以形成较大的开口。将改造后的 P200 枪头从隔膜塞的开口处插入，使枪头朝上，并将隔膜塞固定在无菌收集管上。使用 18 号皮下注射针头穿刺隔膜塞。

现在，打开真空泵，用戴着手套的手指堵住移液管尖端开口，以检查吸力压力。在采奶当天，将母鼠与其幼崽分离，使乳汁在乳腺中积聚。将幼崽保持温暖并置于巢穴中。对母鼠进行麻醉后，用力挤压其一只脚趾，以评估动物对感觉和疼痛的反应。

然后，将兽用眼科软膏涂抹于母鼠眼部，以防止其在麻醉期间眼睛干涩。将麻醉后的母鼠仰卧置于坚固的工作台面上。使用无菌酒精擦拭巾轻轻清洁母鼠的乳腺区域。

在未接受过注射的腹腔一侧，于第四和第五对乳头之间腹膜内注射 1 至 2 个单位的催产素。用非惯用手轻轻抓握母鼠颈部皮肤，然后从乳头基部向顶端挤压乳腺组织，直至可见乳滴。

按下电源按钮开启真空装置。开始挤奶时，将倒置的P200移液器吸头轻轻套在乳头上，用轻柔的抽吸动作将乳汁抽出。依次挤取所有乳头，直至收集到足够的乳汁量。

随后，将麻醉后的母鼠放回笼中，并确保其在麻醉恢复期间保持温暖。每只母鼠可在10分钟内舒适地采集0.1至0.5毫升的乳汁。乳汁脂肪浓度从分娩后第2天的174.4克/升显著增加至分娩后第10天的224.4克/升。

产后第2天与产后第10天的乳糖和总蛋白浓度未显示出显著差异。与产后第2天的乳汁相比，产后第10天乳汁中α-S1-酪蛋白和乳清酸性蛋白的相对丰度更高，而β-酪蛋白在产后第2天乳汁中的丰度则高于产后第10天乳汁。电泳凝胶上蛋白质条带的强度在视觉上证实了各乳蛋白相对丰度的差异。