使用毛细管收集大鼠乳汁及通过奶油离心法估测乳脂含量

本实验的主要目标是介绍如何手动采集哺乳期大鼠的乳汁，以用于实验室对乳汁成分的分析。该方法可用于回答母婴健康领域中的一些关键问题，例如母体饮食如何影响乳汁成分。该技术的主要优势在于，仅需一名研究人员即可完成操作，无需任何专用的真空或抽吸设备。

首先，在挤奶前至少将母鼠与其后代分离五分钟。接着，收集挤奶操作所需的所有材料，如图所示。然后，在加热的手术台上放置一张吸水垫，或使用单独的加热垫，以防止母鼠在挤奶过程中散热。

接下来，检查麻醉系统，以确保在操作前系统中有充足的氧气和异氟烷。然后将用于初始麻醉诱导的面罩连接到机器上，并将维持麻醉用的面罩放置在附近。打开氧气瓶，将流量调节至每分钟1升。

然后打开异氟烷气流，将其流量设置为5%。麻醉后，将气流切换至维持面罩。通过检查足底反射是否消失来确认麻醉程度是否充分。随后将动物以仰卧位放置在吸水垫上。

将异氟烷的流量减少至2%到3%。在整个操作过程中持续监测母鼠，并根据需要调整异氟烷流量，以避免疼痛和呼吸抑制。接下来，使用无菌酒精棉片或清洁垫对一管催产素进行消毒，然后用带有25号针头的1毫升注射器抽取0.1毫升催产素。随后将针头插入母鼠腹部右下象限，针头方向朝向头部，角度为15至30度，深度约为0.5厘米。

回拉活塞，确保注射前存在负压。若未吸出液体，则注入催产素，并立即将针头和注射器丢弃至生物危害容器中。等待约5至15分钟，使催产素刺激乳汁分泌。

在此期间，选择用于采集乳汁的乳房。使用修毛器轻轻去除所选乳房周围区域的毛发，因为毛发可能会影响样本采集。然后用温水清洁乳房。

准备至少两个采奶位点，因为可能需要多个位点进行乳汁采集。待乳汁排出后，轻轻挤压乳头基部，手动排出乳汁。采集时，将乳汁滴入50微升毛细管中收集。

装满后，将毛细管中的乳汁排入无菌的微量离心管中，操作时将曾插入乳头吸取乳汁的一端接触微量离心管内壁。然后使用连接在1 mL注射器上的18号针头，将未能吸入毛细管内的残留乳汁吹出。重复乳汁采集过程，并将乳汁转移至微量离心管中，直至收集到足够的乳汁量。

对于选定的分析，尽量将母鼠处于麻醉状态的总时间控制在一小时以内。挤奶完成后，关闭异氟烷和氧气的气流，并取下母鼠的麻醉面罩。继续监测母鼠，直至其恢复足够的意识，能够维持胸卧姿势。

若无需进一步分析，将乳汁在负80摄氏度下速冻。为准备CCR测定，直接从四环素瓶中吸取15至20微升乳汁，注入微血细胞比容管中，然后用黏土密封剂封闭管端。

将毛细管放入血细胞比容离心机中，封口凹陷处朝向外侧，并确保离心机已平衡。然后以13,700 ×g 离心两分钟。样品离心结束后，从离心机中取出毛细管。

观察样品分离成乳脂层和透明层的情况。使用直尺或卡尺测量并记录管中液体的总长度以及脂肪层或乳脂层的长度。利用此信息，按照随附文本方案中所述方法计算乳脂率（CCR），以确定妊娠期和哺乳期的饮食对乳汁成分的影响。

在断奶时采集了喂食高蛋白、高益生元纤维或对照饮食的伍斯特母猪的乳汁样本。喂食高益生元纤维饮食的母猪所产乳汁的红细胞压积、不良浓度和能量值在数值上最高。然而，在蛋白质方面，这些差异无统计学意义。

然而，从高蛋白饮食组母鼠采集的乳汁中蛋白质浓度最高。不过，这一差异同样无统计学意义。一旦掌握该技术，若操作正确，从母鼠初始麻醉开始，整个过程可在一小时之内完成。

进行该操作时，重要的是要持续监测母鼠，确保在此操作后麻醉过程中不会发生呼吸抑制。其他方法如质谱法可用于回答更多问题，例如测定乳汁中寡糖的组成。观看本视频后，您应能够充分掌握如何手动采集哺乳期大鼠的乳汁。