Erstellung von Murine Experimental Bauchaortenaneurysmen mit Elastase

Dieser chirurgische Eingriff zur Erzeugung eines abdominalen Aortenaneurysmas beginnt mit einem medianen Bauchschnitt. Die Bauchorgane werden zur Seite verlagert, und alle Seitenäste der Aorta werden ligiert. Der proximale und der distale Abschnitt der Aorta werden abgebunden.

Das Herz wird mit einer Nadel punktiert und eine Perfusion mit Elastase über einen durch Hitze zugespitzten Polyethylen-Schlauch durchgeführt. Sobald die Perfusion abgeschlossen ist, wird die Aortenautotomie verschlossen. Die Ligaturen werden entfernt, die Aorta füllt sich mit Blut und die Bauchhöhle wird geschlossen.

Der Maus wird anschließend erlaubt, sich zu erholen, und das Aneurysma wird sich innerhalb von 14 Tagen vollständig dilatieren. Hallo, ich bin Julian Asma aus dem Labor von Fetal Cell in der Abteilung für Kardiovaskuläre Medizin an der Stanford University. Heute zeige ich Ihnen das Verfahren zur Injektion eines neuartigen experimentellen abdominalen Aortenaneurysmas mit Elastase.

Wir verwenden dieses Verfahren in Ihrem Labor, um die PEs der Baucharterie von S. so zu untersuchen. Beginnen wir. Um Ihre Experimente zu starten, wählen Sie eine Maus Ihrer Wahl aus, beispielsweise eine C57BL/6-Maus, und betäuben Sie sie mit inhaliertem Isofluran, bis die Maus bewusstlos ist. Bitte beachten Sie, dass verschiedene Mausstämme in der Rate des Aneurysmawachstums variieren können.

Entfernen Sie die anästhesierte Maus aus der Kammer an einer ausreichend beleuchteten Präparationsstation. Rasieren Sie das Fell vom Abdomen vom Ende des Schambeins bis zur Wurzel der Beine ab. Verwenden Sie Enthaarungscreme, um überschüssiges Haar zu entfernen.

Reinigen Sie die enthaarte Haut mit 70 % Alkohol, bis alle Haare aus dem rasierten Bereich entfernt sind. Anschließend wird die Haut mindestens dreimal mit Betadine abgewischt, wobei zwischen den Reinigungsvorgängen jeweils mit Alkohol nachgewischt wird. Danach wird die Maus in Rückenlage auf das Operationsfeld gelegt, um sie bewusstlos zu halten.

Während der Operation einen Schlauch auf die Nase legen, der Isofluran mit derselben Flussrate zuführt, die zur Induktion der Bewusstlosigkeit verwendet wurde. Die Elastase wird auf Eis gehalten und in eine Spritze aufgezogen. Die Spritze wird anschließend fixiert und neben das Operationsfeld gestellt, und der Katheter wird angeschlossen.

Es ist wichtig, dass die Katheterspitze steril bleibt, was erreicht wird, indem die Spitze in ein steriles Gefäß gegeben wird. Stellen Sie vor dem Öffnen der Maus sicher, dass eine sterile Technik angewendet wird. Beginnen Sie damit, sterile Handschuhe anzuziehen.

Die chirurgischen Instrumente, Scheren, Nadelhalter und Pinzetten müssen vor der Operation desinfiziert werden. Nehmen Sie sich einen Moment Zeit, um sich bewusst zu machen, wie gründlich Sie vorbereitet sind, und versuchen Sie, alle weiteren möglichen Kontaminationsquellen während der Operation zu beseitigen. Falls die sterilen Arbeitsbedingungen während des Eingriffs verletzt werden, desinfizieren Sie Ihr Instrument erneut in einem heißen Perlensterilisator.

Wenn alles vorbereitet ist, beginnen Sie die Operation mit einem langen medianen Bauchschnitt innerhalb der Bauchhöhle. Verlagern Sie die Bauchorgane in den freien Bauchraum oder ziehen Sie sie mit steriler Gaze außerhalb des Bauches zurück, um die Aorta abdominalis freizulegen. Isolieren Sie nun vorsichtig mithilfe einer Pinzette die Aorta abdominalis vom Niveau der linken Nierenvene bis zur Bifurkation.

Im dargestellten Fall existiert ein einzelner Ast, der oberhalb der Stelle liegt, an der wir die Aorta ligieren, und der daher nicht abgebunden werden muss. Falls sich zwischen den Stellen der distalen und proximalen Aortenligatur aortale Äste befinden, ligieren Sie diese innerhalb eines Zentimeters der Bifurkation mit 10 aut-Nähten im proximalen und distalen Bereich der Aorta. Legen Sie vorübergehende 6,0-Seidenligaturen an, um den Blutfluss zu stoppen.

Führen Sie nun eine Autotomie an der Gabelung durch. Beginnen Sie damit, die Gabelung mit einer 30-Gauge-Nadel zu durchstechen. Tapered Polyethylenrohr kann durch die AOR-Autotomie eingeführt und mit einem Knoten befestigt werden.

Verwenden Sie die Pinzette, um das Röhrchen vorsichtig in die Aorta einzuführen. Achten Sie darauf, die endotheliale Schicht nicht durch einen Druck von 100 Millilitern abzulösen. Die Aorta wurde mit Elastase aus einem Salzbeutel, der in einer Höhe von 136 Zentimetern aufgehängt war, mit Quecksilber perfundiert.

Stellen Sie sicher, dass sich keine Luft im Schlauch befindet, da sonst der Druck nicht exakt ist. Die Kochsalzlösung enthält 4,5 Einheiten pro Milliliter. Typ-1-schweinisches Pankreaselastase, das die Aorta innerhalb von fünf bis 15 Minuten füllen sollte.

Während der Perfusion dehnt sich die Aorta typischerweise auf etwa 140 % ihres ursprünglichen Durchmessers aus. Nach Abschluss der Perfusion ist diese zu entfernen und die Aortotomie mit einer 10-0-Naht zu verschließen, um eine Verengung zu vermeiden. Nachdem die Aortotomie verschlossen ist, muss auch die distale Ligatur entfernt werden.

Wenn am reparierten Aortenquerschnitt wenig oder kein Blutungen auftreten, wird die proximale Ligatur entfernt. Bei Blutung stellen Sie zusätzliche vorübergehende 6,0 Nahtligaturen an den proximalen und distalen Abschnitten der Aorta und setzen eine weitere Naht, um die Aortenautotomie vollständig zu verschließen. Die erweiterte Aorta füllt sich unmittelbar nach Entfernung der proximalen Ligatur mit Blut.

Nach Abschluss des Eingriffs an der Aorta werden die Därme in die Bauchhöhle zurückverlagert. Falls sie reponiert wurden, gleiten die Därme als große Einheit zurück, und es besteht keine Notwendigkeit, sich um ihre Geometrie zu sorgen. Mit allen Organen an ihrem Platz kann die äußere Wunde nun in zwei Schichten mit sechs aut Nylon- und Polypropylennähten verschlossen werden.

Verabreichen Sie nun der Maus ein Lokalanästhetikum, beispielsweise einen Tropfen 0,25 %iges Bupivacain pro Zentimeter Inzision. Verabreichen Sie zudem eine Dosis des entzündungshemmenden Wirkstoffs Carprofen in einer Menge von fünf Milligramm pro Kilogramm Körpergewicht subkutan. Die Operation ist nun abgeschlossen, und die Maus sollte auf eine warme Fläche gelegt werden, wo sie in Ruhe aus der Narkose aufwachen kann.

Die Erholung tritt gewöhnlich innerhalb von 15 Minuten ein. Wenn die Maus wieder bei Bewusstsein ist, wird sie in einen Einzelkäfig zurückgebracht und während ihrer Genesung regelmäßig überwacht. Nach dem Eingriff weitet sich die Aorta typischerweise auf etwa 140 bis 160 % ihres ursprünglichen Durchmessers aus.

Diese anfängliche Dilatation zeigt eine Stabilisierung bis zum siebten Tag. Eine schnelle sekundäre Dilatation tritt zwischen dem siebten und dem 14. Tag auf. Am 14. Tag kann das Aneurysma in der infrarenalen Aorta beobachtet werden.

Ich habe Ihnen gerade gezeigt, wie man ein abdominales Aortenaneurysma mit Elastase bei Mäusen induziert. Bei diesem Verfahren ist es wichtig, die Bildung von Blutgerinnseln innerhalb der Aorta zu vermeiden. Das war's.

Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihrem Experiment.