Windowing Chicken Eggs für Developmental Studies

Willkommen im Kramer-Labor. Ich bin Matt Korn, Abteilung für Neurobiologie und Verhalten an der University of California Irvine. Heute zeige ich Ihnen, wie man Hühnereier für verschiedene Manipulationen vorbereitet, einschließlich der Platzierung von Kügelchen, der Injektion von Farbstoffen oder der Untersuchung im Ei.

Ohne weiteres Zögern wollen wir also beginnen. In Ordnung, wir werden nun fortfahren und das Ei reinigen. Der Grund dafür ist, dass sich viele Substanzen im Inkubator anhaften können.

Wir werden dies mit Klebeband versiegeln. Wir möchten vermeiden, dass kleine Partikel in den Bereich gelangen, in dem das Fenster angebracht wird, da dies die Eizelle erreichen und die Wahrscheinlichkeit erhöhen könnte, dass der Embryo stirbt, bevor wir ihn entnehmen. Wie Sie aus dem Inkubator gesehen haben, liegen die Eier mit der größeren Seite nach oben.

Was wir nun tun werden, ist, das Ei zur Seite zu drehen. Dies hat zwei Vorteile: Erstens wird sich das Fenster genau hier befinden, und zweitens muss der Embryo an die Oberseite aufsteigen, damit wir ihn gegebenenfalls manipulieren können.

Ich werde nun einige Eier aus dem Rack, das im Inkubator stand, in einen Papp-Eierhalter umsetzen. Dies ist tatsächlich das Teil, das in der Lieferbox für die Eier enthalten ist. Für heute werden wir es einfach verwenden, um die Eier zu halten.

Die Anordnung liegt nun bei Ihnen. Ich bevorzuge diese Methode, weil ich zu jeder Zeit Zugriff auf alle Eier habe und keines das andere berührt. Sollte ich zufällig ein Ei mit Riss finden, das herunterfällt, hat jedes etwas Abstand zum anderen.

Ich nehme jetzt meine Mullbinde und entnehme einen ordentlichen Stapel wie diesen und teile ihn in zwei Hälften. Ich nehme 70 % Alkohol und fülle so lange darauf, bis ich spüre, dass die Unterseite leicht feucht wird. Das mache ich, weil ich den gesamten Stapel verwenden werde, um alle Eier abzuwischen.

Dann nehme ich einfach ein paar von oben ab und bearbeite eigentlich nur die Oberseite, erreiche dabei aber fast die gesamte Oberfläche des Eies. Nachdem dies erledigt ist, trocknet der Alkohol ziemlich schnell, und wir können fortfahren und Klebeband darauf anbringen. Das Klebeband haftet gut, und bis ich eine Charge fertig gestellt habe, ist normalerweise das erste Ei trocken, sodass wir mit dem nächsten Schritt bei der Ei-Präparation fortfahren können.

Also noch einmal, legen Sie das wieder in den Abfall, und wir können mit dem nächsten Schritt fortfahren. Gut, da nun alle unsere Eier mit Alkohol abgewischt wurden, können wir nun ein Abflussloch an der größeren Seite des Eis, am Basisende des Eis, anlegen. Dies ermöglicht es uns, etwas Albumin zu entnehmen, denn wenn wir das Albumin nicht entfernen, liegt das Embryo nicht richtig.

Wir können keine Manipulationen vornehmen. Daher besteht dies lediglich darin, dass ich ein Messer nehme und dieses Plastikband verwende. Es hat etwas Elastizität, was hervorragend ist.

Nicht nur ermöglicht es uns, über eine Öffnung hinauszugehen, wenn diese etwas größer ist, als wir es wünschen, sondern wenn wir tatsächlich das gesamte Ei abdecken, müssen wir dies hier dehnen. So ist der Bereich, in dem das Fenster angebracht wird, vollständig bedeckt. Ich schneide daher einfach ein Stück auf diese Weise ab und forme dann einen etwa einen Millimeter breiten Streifen.

Und daraus kann ich ein etwa einen Quadratmillimeter großes Stück Klebeband herstellen. Dann lege ich es einfach direkt oberhalb links neben das Datum. Legen Sie es genau an diese Stelle, und Sie können es sehen.

Es haftet sehr gut. Dann kann ich zum Streifen zurückkehren, den ich bereits hergestellt habe, ein weiteres Millimeterstück Klebeband abschneiden und es erneut links neben die Zahl dort platzieren, die eigentlich die Oberseite des Eis darstellt.

Nun, da wir es seitlich gedreht haben, befindet es sich rechts. Und hier noch ein weiteres Teil. Ich trage jetzt keine Handschuhe, weil das Klebeband an den Handschuhen haften würde; außerdem habe ich meine Hände gewaschen.

Ich mache mir an dieser Stelle keine Sorgen darüber, ob sonst etwas die aktive Substanz kontaminiert. Daher nehme ich jetzt eine Schere mit einer scharfen Spitze, gehe in die Mitte der Stelle, an der ich das Klebeband angebracht habe, und drehe sie im Uhrzeigersinn, bis sie sich gerade ein wenig gelöst hat.

Sie werden sehen, dass sich dort ein kleines Loch befindet. Das Loch muss nicht sehr groß sein, da die Spritze es ausreichend weiten wird, sobald wir sie einführen. Auf diese Weise vermeiden wir, direkt mit einer Nadel hineinzustechen und das Ei damit zu zerbrechen, was häufig dazu führt, dass die gesamte Seite des Eis auseinanderbricht.

Dann können wir das Ei nicht mehr verwenden. Okay, jetzt werde ich das Ei ablaufen lassen. Wir haben dieses kleine Loch an der Seite und ich werde diese 10-Milliliter-Spritze und eine ziemlich dicke Nadel verwenden, um das Eiklar zu entnehmen.

Jetzt möchte ich etwa drei oder vier Milliliter, auf jeden Fall mehr als drei, aber nicht viel mehr als vier Komma fünf oder fünf. Dadurch kann sich unser Embryo, der sich momentan an der Oberseite befindet, etwas von der Hülle entfernen. Anschließend können wir unsere Manipulationen durchführen.

Indem ich in einem Winkel von 45 Grad eindringe, befinde ich mich unterhalb des Dotters. Dann möchte ich die Nadel leicht nach rechts drehen, um vorsichtig darunter zu gelangen, und man kann spüren, wie die Nadelspitze gerade den Boden des Eis berührt. Ich werde nun etwa drei oder vier entnehmen, und das gelingt ziemlich gut.

Ich werde nun das Albumin in meinen Abfalleimer hier geben und kann mit den anderen Eiern fortfahren. Okay, ich werde also fortfahren. Sie werden hier sehen, dass das Loch, das ich zum Ablassen gemacht habe, etwas größer ist, als ich es gerne hätte, aber das stellt sich letztendlich als in Ordnung heraus.

Was mich beschäftigen möchte, ist, dass ich beim Einstechen der Nadel das Ei nicht noch stärker anbreche. Daher werde ich das jetzt vorsichtig durchführen. Okay, ich kann bereits erkennen, dass das Ei einen kleinen Riss aufweist.

Kleine Risse sind jetzt in Ordnung, aber Sie sollten besorgt sein, wenn sich der Riss bis zu einer anderen Ebene des Eies erstreckt. Und genau das ist hier der Fall. Das können Sie an dem Loch erkennen.

Es reicht praktisch bis nach oben. Und genau hier wird unser Fenster liegen. Leider müssen wir für dieses Ei vorgehen und es entsorgen.

Und es gibt nichts Besonderes beim Entsorgen. Sie müssen kein spezielles Protokoll oder Ähnliches verfassen. Einfach weitermachen und es in den Abfalleimer geben.

Wir verwenden diese schwarzen Abfalleimer, um sie als Tierabfallbehälter zu kennzeichnen; abgesehen davon ist bereits alles erledigt. Wir können zum nächsten Ei übergehen. Gut, nachdem wir nun alle unsere Eier entleert haben, können wir die Abflussöffnung verschließen.

Das ist jetzt wichtig, weil wir sonst im Inneren des Inkubators eine erhebliche Verdunstung dessen, was noch vom Albumin übrig ist, bekommen können. Und ein trockenes Ei ist ein totes Ei. Deshalb nehmen wir jetzt einfach ein etwa gleich großes Stück Klebeband und legen es über die Öffnung, sodass wir uns keine Gedanken mehr machen müssen, erneut in diese Öffnung eingreifen zu müssen.

In einigen Fällen, wenn Sie entscheiden, dass Sie mehr Albumin aus einem Ei entnehmen möchten, sobald es geöffnet ist, fungiert dieses Loch als eine Art abgedichteter Bereich, in den Sie dann eine Nadel einführen können, ohne große Mengen Albumin zu verlieren. Okay, funktioniert es? Okay, jetzt werden wir die Eier mit einem passenden Stück Klebeband abdecken.

Und ich vergleiche das ein wenig damit, ein Stück Klebeband über einen Ballon zu kleben, bevor man eine kleine Nadel hineinsticht. Das Coole ist, dass der Ballon nicht platzt, und in diesem Fall befindet sich ein kleines Stück Band über dem Ei. Das Ei reißt nicht an mehreren Stellen auf, und anschließend kann die Öffnung verschlossen werden. Wenn dann die Öffnung geschlossen wird, erzeugt das verwendete Band gewissermaßen eine saubere, kleine Dichtung, sodass wir uns keine Sorgen über Verdunstung machen müssen.

Sie sehen also, dass die Größe des Klebebands vermutlich die größte ist, die ich bisher zugeschnitten habe, aber selbst dann werde ich es noch etwas dehnen und leicht daran ziehen, mit etwas Zugspannung, und es über das Ei legen. Dann werde ich hier hinten herumgehen und es sehr vorsichtig über das Ei dehnen, sodass keine Falten genau dort entstehen, wo später mein Fenster sein wird. Und Sie können das Klebeband etwas neu positionieren.

Es klebt nicht so stark, dass man sich Sorgen machen müsste. Einmal befestigt, bleibt es befestigt. Und Sie können sehen, dass dieser allgemeine Bereich hier der ist, in dem ich nun den Ausschnitt schneiden werde.

Okay, da nun alle Eier mit Klebeband versehen sind, können wir fortfahren und ein Fenster an der Oberseite schneiden. Dies kann der schwierigste Teil sein, und hier verliert man oft den Großteil der Eier. Ich werde daher einfach meine Schere mit einer alkoholgetränkten Gazetupfer gut abwischen und sie anschließend trocknen.

Alkohol verdunstet praktisch von selbst, aber Sie möchten nicht, dass Alkohol direkt ins Ei gelangt. Daher gehe ich einfach in die Mitte dort, wo das Klebeband ist, und verwende erneut die kreisförmige Bewegung im und gegen den Uhrzeigersinn, bis ich höre, wie es leicht knackt. Dann weiß ich, dass meine Klinge eingedrungen ist.

Dann möchte ich die Schere etwas nach außen bewegen, sodass sie fast parallel zur Oberfläche des Eis liegt. Anschließend mache ich kleine Schnitte, bis ich das gesamte Scherenblatt hineinbringen kann. Sobald ich etwa einen halben Kreis geschaffen habe, kehre ich in die entgegengesetzte Richtung zurück. Ich möchte den Kreis nicht vollständig schließen, da ich ein Fenster behalten möchte, aber danach kann ich das Ei einfach öffnen.

Und im Moment sehen sie etwa so alt aus, wie ich es erwartet hatte, haben noch nicht viele Blutgefäße, aber es befindet sich etwas Blut in der Umgebung, wo das Embryo sitzt, hauptsächlich aus dem Bereich des Delion, aus dem das Blut nun zu fließen begonnen hat, und der Herzschlag ist verschwunden. Ich werde das jetzt einfach schließen, es so liegen lassen und erneut herumgehen, dann schließe ich die Fenster. Und noch einmal, einfach flach auf die Oberfläche legen und auf die andere Seite zurückführen.

Und gut, hier haben wir ein paar Bläschen, und es stellt sich heraus, dass sich der Embryo seitlich befindet. Jetzt haben wir zwei Möglichkeiten. Wenn wir genügend Eier haben und es nicht darauf ankommt, jedes einzelne zu verwenden, können wir dieses hier einfach aussortieren.

Oder wir können das Fenster schließen und es einfach so einstellen, dass das Embryo wieder an die Oberseite aufsteigt, wo wir es erneut haben möchten. Und bis wir es in unseren Manipulationen erreichen, könnte es sich bereits an der gewünschten Position befinden. Falls nicht, können wir es zu diesem Zeitpunkt verwerfen.

Ich habe es hier gerade einfach in einem Winkel positioniert. Es wird etwas Albumin abfließen, aber das hilft dem Embryo, an die Stelle zurückzukehren, wo er hingehört. Gut, jetzt, da wir alle diese Fenster haben, müssen wir sicherstellen, dass sie geschlossen sind, und wir möchten sie geschlossen haben, bevor wir irgendwelche Manipulationen vornehmen.

Und dann können wir fortfahren und das Ei erneut verschließen. Doch wenn ein offenes Fenster vorhanden ist, kann der Eigelb manchmal herausrutschen. Wenn Sie wissen, dass das Ei leicht kippt, während Sie von einem Raum in den anderen gehen, möchten Sie nicht, dass der gesamte Inhalt herausfällt.

Ich schneide also lediglich ein weiteres etwa zwei oder drei Millimeter langes und, Entschuldigung, einen Millimeter breites Stück der Plastikfolie ab. Ich lege es gerne genau in die Mitte. Wenn ich es dann vor dem Ei nach unten ziehen kann, spannt es sich etwas an.

Und Sie können sehen, wo die Öffnung sitzt, genau dort, wo das andere Klebeband war, wo wir die Öffnung geschnitten haben, wodurch sie für diesen Zeitpunkt gut abgedichtet ist. Ich meine, wir werden gleich einige Manipulationen in Kürze vornehmen, daher muss sie nicht vollständig luftdicht sein. So bereiten Sie Ihre Eier vor und schneiden die Öffnung ein.

Viel Erfolg bei Ihren Experimenten.