Maus Eye Enukleation für Remote High-throughput Phänotypisierung

Dieses Video veranschaulicht das Mausauge und die Enukleation, also das Entfernen des Augapfels aus der Augenhöhle. Der Augapfel wird durch den unteren Lidrand begrenzt. Hier befindet sich der mediale oder nasale Augenwinkel.

Im Hintergrund befindet sich der laterale oder temporale Augenwinkel. Oben liegt der obere Lidrand. Hier ist eine chirurgische Probe.

Die Nadel zeigt auf die klare Hornhaut. Man kann ein wenig der Linse sehen, die hinter der Regenbogenhaut hervorragt. Die Regenbogenhaut ist hier braun und bedeckt die Linse.

Die wichtigste chirurgische Orientierungsmarke ist diese weiße Linie, bzw. der Limbus, an dem eine Punktion direkt hinter dieser Linie vorgenommen wird. Die hintere Hälfte des Bulbus liegt hinter dem Limbus, und wir weisen hier auf eine Muskelansatzstelle hin. Man kann den Muskel erkennen, der hier am Bulbus anliegt, sowie das Bindegewebe, das die Orbita ausfüllt und die Arian-Drüse enthält.

Und schließlich ist dies der weiße, lange Streifen des Sehnervs aus einer stumpfen Präparation. Ziehen Sie mit einer gebogenen Tupferpinzette, die mit einer scharfen Spitze modifiziert wurde, zunächst die Augenlider auseinander. Dadurch wird das Auge meist nach vorne und außen gedrückt.

Verwenden Sie Ihre Pinzette vorsichtig, um in die Augenhöhle und hinter den Augapfel zu gelangen, drücken Sie sanft hinter dem Augapfel, ohne diesen zu quetschen, und ziehen Sie nach vorne. Sie sollten das Bindegewebe erfasst und nicht den Augapfel ergriffen haben. Wenn Sie den Augapfel zur Seite drehen, können Sie das Orbitagewebe zusammen mit dem weißen Sehnerv erkennen.

Dies ist eine zweite Präparation, die erneut zeigen soll, dass man am Augenwinkel eintritt, die Pinzette hinter den Augapfel schiebt, das Bindegewebe erfasst und nach vorne zieht, ohne dabei auf den Augapfel selbst Druck auszuüben. Auch hier sieht man das Bindegewebe im langen, weißen Streifen des Sehnervs. Um eine Punktionswunde zu erzeugen, greifen Sie den Augapfel an einer Muskelansatzstelle und führen eine Nadel hinter der Limbusregion ein, direkt neben der Stelle, an der Sie das Auge halten, um es zu stabilisieren.

Dies ermöglicht es dem Fixans mittel, in das Auge einzudringen. Wenn Sie die Punktion weit entfernt von der Stelle vornehmen, an der Sie das Auge halten, wird der Augapfel sehr instabil sein, und es wird schwierig sein, die Wunde so lang zu halten, ohne das Auge zu komprimieren oder unangemessenen Druck auszuüben. Sie können auch das gesamte Bindegewebe direkt hinter dem Augapfel selbst erfassen.

Einige Fixanzien erfordern keine Einstichwunde. Im Allgemeinen geben wir das Auge in ein fünf ml fassendes Szintillationsfläschchen mit mindestens drei ml Fixans, um sicherzustellen, dass das Auge vollständig bedeckt ist. Bei durchströmten Tieren ist eine scharfe Präparation erforderlich.

Wir verwenden eine gebogene Pinzette aus Kalibri und gebogene Wescott-Scheren. Fassen Sie das Unterlid mit der Kalibri-Pinzette. Führen Sie die Schere entlang des Orbitalknochens ein und beginnen Sie, das Bindegewebe zu durchtrennen.

Wir verwenden die Kurve, die vom Augapfel wegzeigt, und vermeiden das Zuschneiden. Jeder Bereich des Auges entlang des gesamten unteren Lidrandes von einem Lidwinkel zum anderen ist geeignet. An einer bestimmten Stelle wird der größte Teil des Bindegewebes entfernt sein, sodass man die Schere hinter den Augapfel schieben und diesen wegziehen kann.

Hier ist erneut ein weiteres Beispiel, bei dem die Schere in die Augenhöhle eingeführt wird, jedoch gegen den Augenhöhlenknochen und nicht gegen den Augapfel, um das Bindegewebe abzuschneiden. Dadurch beginnt sich der Augapfel zu lösen, der wie ein Basketball im Korb sitzt. Verwenden Sie die Pinzette, um die Augenlider zurückzuziehen, und führen Sie vorsichtige, kurze Schnitte um den Augapfel herum aus.

Hier fassen wir das Bindegewebe oder einen Muskelansatz mit dem Collibra und trennen den Augapfel vollständig vom orbitären Bindegewebe ab. Nachdem die Augäpfel angemessen fixiert wurden und falls sie transportiert werden müssen, bringen wir etwas Parafilm um das Sammelgefäß herum an.

Die Verpackung muss den Vorschriften Ihrer Universität und der Regierung entsprechen. Üblicherweise geben wir diese in einen Behälter mit etwas Watte, um eventuelle Flüssigkeiten aufzufangen; dieser Behälter muss sehr dicht verschlossen werden. Dieser Versandbehälter wird anschließend in eine Luftpolsterfolie verpackt.

Dies wird zusammen mit allen erforderlichen Unterlagen in ein flüssiges Laborversandpaket gegeben.