Schnelle Bestimmung der Wärmeleistung und nozizeptiven Grenzwerts bei diabetischen Ratten

Das allgemeine Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die thermonozizeptive Schwelle von Kontroll- und diabetischen Ratten zu bestimmen. Der erste Schritt ist, ein Tier auf die inkrementelle Heizplatte und das Analgesiemessgerät zu stellen. Anschließend wird die Temperatur der Heizplatte schrittweise erhöht, während die Oberfläche erwärmt wird.

Das Tier wird auf das Fehlen von Abwehrverhalten hin beobachtet. Wenn dieses Verhalten beobachtet wird, wird die Erwärmung gestoppt und die Temperatur der Platte in diesem Moment aufgezeichnet. Letztendlich können Ergebnisse erhalten werden, die Veränderungen der thermischen nozizeptiven Schwelle bei Tieren zeigen, die mit Analgetika behandelt wurden oder an schmerzhafter diabetischer Neuropathie leiden.

Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie dem Hitzetablett, das normalerweise auf eine über dem Schwellenwert liegende Temperatur eingestellt wird, besteht darin, dass unsere Methode die Temperatur der Platte schrittweise erhöht und dadurch die genaue Bestimmung der thermischen nozizeptiven Schwelle ermöglicht. Die thermische nozizeptive Schwelle oder TNT wird mithilfe des inkrementellen Hitzetablett-Analgesiemeters oder IH pam bestimmt. Die Bestandteile dieses Systems umfassen eine Beobachtungskammer aus Plexiglas, eine temperaturgesteuerte Aluminiumplatte, ein Tastenfeld zur Programmierung sowie einen Fußschalter zur Fernbedienung des Geräts.

Die Daten werden mithilfe einer benutzerdefinierten Software auf einem nahegelegenen Computer erfasst. Alternativ können über einen seriellen Anschluss am Gerät auch Papierausdrucke angefertigt werden. Platzieren Sie einen Spiegel hinter der Plexiglas-Kammer, um die Sichtbarkeit des Verhaltens des Tieres zu verbessern.

Stellen Sie anschließend die gewünschten Heizraten sowie die anfängliche Standby- und die endgültige Abschalttemperatur ein. Drücken Sie den Fußschalter, um das System zu starten und zu stoppen. Vergewissern Sie sich, dass die anfängliche Standby- und die endgültige Abschalttemperatur aufgezeichnet wurden, sowie die Zeit, die benötigt wird, um die Endtemperatur zu erreichen.

Falls gewünscht, kann der Experimentator das System an sich selbst testen. Die Hand wird im Moment des Schmerzes von der Metallplatte zurückgezogen. Die Wahrnehmung darf weder die Haut schädigen noch später Unbehagen verursachen.

Beginnen Sie die Akklimatisierung am Abend zuvor, indem Sie die Käfige auf die Arbeitsfläche stellen, an der die Tests durchgeführt werden. Zwei Stunden vor dem Testen schalten Sie die IH-Pfanne ein, um die Tiere mit dem Hintergrundgeräusch des Geräts vertraut zu machen.

An diesem Punkt kann das System wie zuvor gezeigt eingerichtet und getestet werden. Nachdem sich die Tiere an die Umgebung gewöhnt haben, setzen Sie vorsichtig eine Ratte in die Plexiglas-Kammer auf die warme Oberfläche. Lassen Sie das Tier einige Minuten lang die Kammer erkunden.

Beginnen Sie mit der Testung. Sobald das Tier sich soweit erholt hat, dass der Versuch gestartet werden kann, betätigen Sie den Fußschalter, um die Platte zu erwärmen. Beobachten Sie das Verhalten des Tieres, während die Platte erhitzt wird.

Im Allgemeinen werden Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben, da die Identifizierung massiver angriffslustiger Verhaltensweisen nicht immer einfach ist und Übung erfordert. Angriffslustiges Verhalten zeichnet sich nicht durch das Lecken, Schütteln oder Heben eines der hinteren Poren aus. Es ist hilfreich zu beachten, dass das zuerst beobachtete Verhalten das Lecken der vier Poren sein kann, gefolgt von einer Reaktion der hinteren Poren.

Wenn ein stark abweichendes Verhalten beobachtet wird, drücken Sie den Fußschalter, um den Versuch zu beenden, und bringen Sie das Tier zurück in seinen Heimkäfig. Die Temperatur, die dieses Verhalten hervorruft, wird als thermische nozizeptive Schwelle oder TNT des Kontrolltiers betrachtet. Die Einheit wird gereinigt, und der Test wird für das nächste zu untersuchende Tier wiederholt.

Hier sind die thermischen nozizeptiven Schwellenwerte normaler erwachsener Ratten und Mäuse. Die Daten zeigen, dass sich die TNT von Ratten nicht veränderte, wenn sie über einen Zeitraum von vier Tagen getestet wurden. Ebenso war die TNT von Mäusen zwischen verschiedenen Altersstufen konsistent.

In diesem Beispiel wurden die thermischen Nociceptions-Schwellen (TN TS) von jungen erwachsenen STZ-diabetischen Ratten wiederholt gemessen. Ein stetiger Abfall der thermischen Nociceptions-Schwellen ist ab zwei Wochen nach der Induktion des Diabetes erkennbar. Hier wurde die IH-Pam verwendet, um die akuten analgetischen Eigenschaften der schmerzhemmenden Substanz zu testen.

A, zeigte die Verbindung im Vergleich zu den Tieren, die Fahrzeugsubstanzen erhielten, eine leichte analgetische Wirkung bei Kontrolltieren. Die Analgesie war jedoch bei diabetischen Tieren, die die Verbindung erhielten, stärker ausgeprägt als bei den Kontrolltieren mit Fahrzeugsubstanzen. Während des Durchführens dieses Verfahrens ist es äußerst wichtig, das Verhalten der Tiere kontinuierlich zu überwachen, insbesondere die Vorgänge in der Nähe des cephalen Endes des Tieres.