Molekulare Federkonstantenanalyse mittels Biomembran-Kraftsondenspektroskopie

Dieses Video beschreibt Schritt-für-Schritt-Verfahren zur Verwendung von Biomembrane Force Probe oder BFP zur Messung der molekularen Federkonstante. In der Kraftsonde ist BFP kürzlich in der nativen Zelloberfläche oder in der SITU Dynamic Force Spectroscopy-Analyse aufgetaucht. Das Hauptziel dieser Technik ist es, die Genetik der Einzelmolekülbindung zu messen.

Dieses Datenanalyseverfahren ist eine einfache, aber kraftvolle Botschaft und liefert mechanische Informationen, insbesondere die dynamische Kraft und Entzündung der Zellmembran, die Moleküle exprimiert. Während des BFP-Experimentzyklus kann das Sondenmikrobiom mit den roten Blutkörperchen und dem Nachlass, der Zielzelle und der molekularen Bindung des Ligandenrezeptors zwischen der Sonde und dem Ziel als ein reihengebundenes Gehirnsystem betrachtet werden. Basierend auf dem Hookeschen Gesetz ist der Kehrwert der Gesamtfederkonstante eines reihengebundenen Federsystems gleich der Summe der inversen Federkonstante jeder einzelnen Komponente, wie die Gleichung zeigt.

Die Federkonstante der roten Blutkörperchen wird basierend auf der Ereignisbewegung berechnet, die von der radialen Mikropipette der Sonde in der Öffnung abhängt. Die roten Blutkörperchen, der kreisförmige Kontaktbereich zwischen den roten Blutkörperchen und dem Nachlass und der Mikropipetten-Aspirationspression. Die BFP-Straßendaten werden von einem selbstgebauten virtuellen Instrument mit linker Ansicht erhalten, das die Bewegung der Zielmikropipette durch einen PAs-Übersetzer steuert.

Ein vollständiger PFP-Touch-Zyklus besteht aus fünf Stufen. Approach.Impinge.Contact. Zurückziehen und Dissoziieren. Am Anfang wird die Robusto APICS-Position als X gleich 0 in schwarzer Deshine bezeichnet.

Das Ziel wird dann von einem Stück oder Übersetzer angetrieben, um das Robusto zu treffen und zu komprimieren, um eine negative Nachlassbewegung zu verursachen. Sie notieren es als X kleiner als Null in der roten Strichlinie. In der Rückzugsphase bewegen sich die roten Busto-Apex von der Position X kleiner als Null zurück in die Position X gleich Null, die als Druckphase bezeichnet wird.

Wenn eine Bindung zwischen dem Ligandenrezeptormolekülkomplex gebildet wird, würden sich die roten Blutkörperchen weiter von anderen positiven Richtungen unterscheiden. Diese X-Periode größer als Null wird als Zugphase der Rückzugsstufe bezeichnet. Die Rückzugsstufe ist der kritischste Teil, um die Federkonstante des Bindungsmoleküls zu bestimmen.

Sammeln Sie Kraft- und Zeitdaten auf der Straße mit der Datenerfassungsplattform BSP. Jedes Experiment zeichnet in der Regel 50 bis 200 Berührungszyklen auf, öffnen Sie die PFP-Datenanalysesoftware. Klicken Sie auf das gelbe Ordnersymbol und wählen Sie die entsprechende Zeilendatendatei aus, indem Sie darauf doppelklicken.

Wir sind auf dem Programm. Klicken Sie dann auf die Pfeiltasten nach oben und unten, um zwischen den Ereignissen zu wechseln. Verwenden der Ausreißerausschlusskriterien, um ungültige Ereignisse herauszufiltern.

Wählen Sie den exportierenden Datentyp aus, der zum Zeitformat gezwungen wird, und wählen Sie den entsprechenden Statuszeitbereich aus. Klicken Sie auf die Schaltfläche Plotdaten exportieren. Die exportierten Daten werden standardmäßig als Textdatei gespeichert.

Diese Textdatei enthält zwei Datenspalten. Es ist die erste Spalte, die die Zeitväter darstellt, und die zweite Spalte, die die entsprechende Kraft zu jedem Zeitpunkt darstellt. Zeichnen Sie die Kraft-Zeit-Kurve mit Tabellenkalkulationssoftware auf, um die Erzwungen-Gegen-Verschiebungs-Kurve zu erhalten.

Multiplizieren Sie den Zeitwert jedes Datenpunkts mit der Willow Steel PSO-Bewegung. Null den ersten Datenpunkt, indem der kleinste Verschiebungswert von jedem Datenpunkt subtrahiert wird. Diese horizontale Transformation hat keinen Einfluss auf die nachfolgende Federkonstantenberechnung.

In der Kraft-Verschiebungs-Kurve unterschieden sich zwei verschiedene Akteursgruppen, wenn die neue Kraftsteigung identifiziert werden kann. Jede repräsentiert die Druckphase und die 10-Stilphase. Passen Sie jeder Datengruppe eine Regressionslinie an.

Die Linie mit steilerer Steigung stellt die Gesamtfederkonstante an einer Kompressorphase dar, die als K1 bezeichnet wird. Und die Linie, die am kleinsten oben war, repräsentiert die Linie in dieser 10-Stilphase, die als K2.As bezeichnet wird, die Gesamtfederkonstante ist der Kehrwert des Sohnes der Serienfederkonstante jeder Komponente. Während der Druckphase des Beat-to-Cell-Modus wird die molekulare Bindung nicht gedehnt, daher wird die molekulare Bindungsfederkonstante nicht berücksichtigt. Die Federkonstante der Zielzelle wird als die angezeigte Gleichung beschrieben, wobei K1 die Gesamtfederkonstante während der Kompressorphase darstellt.

In der 10-Stil-Phase des Beat-to-Sell-Modus ist die gesamtfederkonstante die Sonne der uversen Frühlingskonstante der molekularen Bindung der roten Blutkörperchen. Und die Zielzelle verwendet die angezeigte Gleichung, um die Molekularbindungsfederkonstante zu berechnen, die K2 die Gesamtfederkonstante darstellt. Sie lesen die 10-Stopp-Phase.

Im Beat-to-Beat-Modus, da die B-Verformung vernachlässigbar ist, nähert sich der Begriff, der die Umkehrung der Zielzellfederkonstante beschreibt, Null, daher ist die Gesamtfederkonstante in der Kompressorphase äquivalent zur Federkonstante der roten Blutkörperchen, die als folgende Gleichung angezeigt wird. In der Zugphase kann die Federkonstante der molekularen Bindung berechnet werden, indem der Effekt der roten Blutkörperchen als folgende Gleichung subtrahiert wird. Sammeln Sie Federkonstanten der Seitenwind-Integrationslage B, des Beta-3-Komplexes, der K562-Zelle und der Febrifugine-Integrationseinstellung B Beta drei-Komplexe, berechnen Sie den Mittelwert und die Standardabweichung der abgeleiteten Federkonstanten auf einer Newton- oder Nanometer-Skala.

Jetzt sollten Sie ein besseres Verständnis dafür haben, was die Anforderungen an die Messung und Federkonstante aus den VFD-Daten sind. Die Unterschiede zwischen dem Beat-to-Cell-Modus und dem Beat-to-Beat-Modus sollten beachtet werden. Verschiedene Molekül präsentierende Dienste haben unterschiedliche Abwehrkräfte für das Maß der Federkonstante.

Zusammenfassend beschreibt dieses Schritt-für-Schritt-Verfahren, wie die molekulare Federkonstantenanalyse mit BFP durchgeführt wird. Wir gehen davon aus, dass in Zukunft Anstrengungen unternommen werden, um die BFP-Datenerfassung und DFS-Analyse in einem Computer-Rest-Programm zu automatisieren und zu integrieren. Machen Sie die gesamte BFP-Betriebsdatenanalyse benutzerfreundlicher und durchgehend hoch.