Ratón enucleación del ojo por remoto de alto rendimiento fenotipificación
19 de noviembre de 2011
La técnica de disección ilustra la enucleación del ojo del ratón para la fijación del tejido para realizar el fenotipado de alto rendimiento pantallas.
Este video ilustrará el ojo del ratón y la enucleación, es decir, la extracción del globo ocular de la órbita. El globo ocular está delimitado por el margen del párpado inferior. Aquí se encuentra el ángulo medial o nasolagrimal.
En la parte posterior se encuentra el ángulo temporal o lateral. Por encima está el borde del párpado superior. Aquí hay un espécimen quirúrgico.
La aguja está apuntando hacia la córnea transparente. Podemos ver un poco del cristalino sobresaliendo más allá del iris. El iris está aquí en color marrón, cubriendo el cristalino.
El punto de referencia quirúrgico más importante es esta línea blanca, o el limbo, donde se realizará una herida punzante justo detrás de ella. La mitad posterior del globo ocular se encuentra detrás del limbo y estamos señalando una inserción muscular. Puede observarse el músculo situado contra el globo aquí, y luego el tejido conectivo que llena la órbita y que incluye la glándula lagrimal.
Y finalmente, esta es la larga franja blanca del nervio óptico obtenida mediante una disección roma. Utilizando una pinza curva para apósitos modificada con una punta afilada, comience separando los párpados. Esto tiende a hacer que el ojo sobresalga hacia afuera.
Utilice cuidadosamente la pinza para introducirla en la órbita y detrás del globo ocular, comprima suavemente detrás del globo sin apretarlo y tire hacia adelante. Debería haber logrado agarrar el tejido conectivo y no el globo ocular. Si gira el globo ocular hacia un lado, puede observar el tejido orbitario junto con el nervio óptico blanco.
Esta es una segunda disección solo para mostrar nuevamente que se accede por el canto, se introducen la pinza detrás del globo ocular, se agarra el tejido conjuntivo y se tira hacia adelante sin ejercer presión sobre el globo ocular en sí. Nuevamente, puede observarse el tejido conjuntivo en la larga franja blanca del nervio óptico. Para crear una herida por punción, sujete el globo ocular por una inserción muscular e introduzca una aguja detrás del limbo, justo al lado del punto donde sostiene el ojo para estabilizarlo.
Esto permitirá que el fijador entre en el ojo. Si realiza la punción lejos del lugar donde sostiene el ojo, el globo ocular será muy inestable y será difícil hacer esa herida sin comprimir el ojo o aplicar presión excesiva. También puede sujetar todo el tejido conectivo justo detrás del globo ocular.
Algunos fijadores no requieren una herida por punción. En general, colocamos el ojo en un vial de centelleo de cinco cc con al menos tres cc de fijador para asegurarnos de que el ojo quede sumergido. Para animales fijados por perfusión, es necesaria una disección precisa.
Utilizamos una pinza curva de calibre calibri y tijeras curvas de Wescott. Sujete el párpado inferior con la pinza de calibre calibri. Introduzca las tijeras contra el hueso orbitario y comience a cortar el tejido conectivo.
Utilizamos la curva alejada del globo ocular y evitamos medir. Cualquier parte del ojo funcionará a lo largo de todo el borde del párpado inferior, desde un ángulo hasta el otro. En un punto determinado, se eliminará la mayor parte del tejido conectivo, y podrá deslizar las tijeras detrás del globo y separarlo.
Aquí hay otro ejemplo nuevamente: inserte las tijeras en la órbita, pero contra el hueso orbitario en lugar del globo ocular, y corte el tejido conectivo. Esto comenzará a liberar el globo ocular, que es como una pelota de baloncesto dentro de una cesta. Use la pinza para retraer los párpados y realice cortes suaves y cortos alrededor del globo ocular.
Aquí sujetamos el tejido conectivo o una inserción muscular con el Collibra y terminamos de cortar el globo ocular del tejido conectivo orbitario. Después de que los globos oculares están adecuadamente fijados, y si es necesario transportarlos, colocamos una película para sellar alrededor del vial de almacenamiento.
El embalaje debe cumplir con las regulaciones de su universidad y del gobierno. Normalmente colocamos estos elementos en un recipiente con algo de algodón para atrapar cualquier líquido; este recipiente debe sellarse muy bien. Luego, este recipiente de envío se coloca en una bolsa de burbujas.
Esto se coloca en un embalaje de envío para líquidos de laboratorio, junto con cualquier documentación.
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Descripción general
Este video ilustra la técnica de enucleación del ojo de ratón, que es fundamental para la fijación del tejido en cribados fenotípicos de alto rendimiento. El procedimiento consiste en extraer el globo ocular de su cavidad, destacando los puntos de referencia anatómicos para mayor claridad.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biología
Antecedentes
- La enucleación es una técnica fundamental en diversos estudios biológicos.
- Comprender la anatomía del ojo ayuda en procedimientos quirúrgicos precisos.
- Este método es esencial para aplicaciones de cribado de alto rendimiento.
- La fijación adecuada del tejido es necesaria para un fenotipado preciso.
Objetivo del estudio
- Demostrar la técnica de enucleación con fines educativos.
- Proporcionar una guía visual para investigadores que realicen procedimientos similares.
- Mejorar la comprensión de los puntos de referencia anatómicos durante la cirugía.
Métodos Utilizados
- Video que demuestra el proceso de enucleación.
- Identificación de las características anatómicas clave del ojo del ratón.
- Guía paso a paso para realizar el procedimiento.
- Ayudas visuales para apoyar el aprendizaje y la aplicación.
Resultados principales
- Visualización clara de la técnica de enucleación.
- Identificación del canto medial y lateral.
- Exhibición del espécimen quirúrgico tras la enucleación.
- Comprensión mejorada del procedimiento para análisis de alto rendimiento.
Conclusiones
- El video sirve como una herramienta educativa eficaz para investigadores.
- Comprender el proceso de enucleación es fundamental para una fijación de tejidos exitosa.
- Una técnica adecuada puede mejorar los resultados en estudios de fenotipificación.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
El fenotipado remoto y de alto rendimiento de ojos de ratón permite la utilización distribuida de recursos genéticos y acelera el descubrimiento de correlaciones entre genotipo y fenotipo en modelos de enfermedades oftálmicas. Protocolos estandarizados de enucleación y transferencia de tejidos reducen las barreras geográficas y operativas, favoreciendo investigaciones preclínicas escalables y multilocalizadas. Este enfoque mejora el acceso general a líneas transgénicas raras o dispersas geográficamente para la validación temprana de objetivos y el cribado fenotípico.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biofármacos
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Facilita la recolección sistemática de tejidos oculares de diversos antecedentes genéticos para estudios basados en hipótesis.
- Permite la validación funcional de genes candidatos implicados en el desarrollo y las enfermedades oculares.
- Apoya la confianza predictiva al vincular perturbaciones genéticas con resultados fenotípicos.
Desarrollo de pruebas y cribado
- Proporciona muestras de tejido fijadas y estandarizadas adecuadas para ensayos moleculares y morfológicos posteriores.
- Mejora la reproducibilidad y comparabilidad entre cribados fenotípicos realizados en múltiples centros.
- Permite la preparación escalable de muestras para plataformas de cribado de alto rendimiento.
Investigación Traductacional y Preclínica
- Asocia la fenotipificación de ratones con el descubrimiento traslacional de biomarcadores para enfermedades oftálmicas humanas.
- Apoya la continuidad desde el descubrimiento genético hasta la validación preclínica de los mecanismos de la enfermedad.
- Reduce las barreras logísticas para acceder a modelos de ratón raros o distribuidos geográficamente.
Integración de la Línea de Producción y Flujo de Trabajo
Este protocolo de enucleación remota y transferencia de tejidos se integra en la fase temprana de descubrimiento y en la etapa preclínica, conectando la generación de modelos genéticos con la fenotipificación y el análisis centralizados.
- Biología del Descubrimiento: Permite la verificación de hipótesis y la reducción de riesgos mecanicistas al proporcionar acceso a diversos modelos genéticos.
- Selección: Estandariza la preparación de muestras para ensayos fenotípicos cuantitativos y reproducibles.
- Análisis: Facilita la obtención de datos morfológicos y moleculares para análisis comparativo.
- Investigación Traducional: Facilita la correlación entre fenotipos murinos y biomarcadores de enfermedades humanas.
- Reutilización Empresarial: Establece un protocolo reutilizable para la adquisición distribuida de tejidos en redes de investigación.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva en las asociaciones genotipo-fenotipo y en la validación de dianas.
- Valor operativo: Optimiza la logística, estandariza los procedimientos y posibilita la escalabilidad en múltiples sitios.
- Valor estratégico: Mejora la toma de decisiones de avance/no avance mediante la ampliación del acceso a datos fenotípicos procedentes de modelos raros.
- Impacto en la cartera: Apoya la priorización ajustada al riesgo de dianas genéticas y modelos de enfermedad.
Consideraciones de Implementación
- Requiere dominio quirúrgico en la enucleación del ojo de ratón y manejo de tejidos.
- Necesita acceso a reactivos de fijación, contenedores de envío validados y cumplimiento de las regulaciones para el envío.
- Exige estandarización entre distintos centros de los protocolos de recolección y documentación.
- Adaptable a flujos de trabajo con tejidos sin fijar y con fijación por perfusión, según lo indicado en el protocolo.
- Depende de las directrices institucionales y gubernamentales para el transporte de muestras biológicas.
