Modelo experimental de endocarditis Resistente a la Meticilina

El objetivo general de este procedimiento es establecer un modelo experimental de endocarditis infecciosa en ratas. Esto se logra primero cultivando aureus y preparando catéteres quirúrgicos para la infección. A continuación, se prepara el área quirúrgica y se anestesia al animal.

Una vez que el animal está anestesiado, se inserta un catéter a través de la arteria carótida derecha hacia el corazón. El paso final consiste en infectar a los animales con aureus mediante inyección en la vena de la cola. Finalmente, se disecan los tejidos diana y se preparan para el cultivo cuantitativo.

La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes, como un modelo rápido de endocarditis, es que el modelo de endocarditis roja puede utilizarse con el sistema de imagen in vivo, Ivus. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la patogénesis oral, como la virulencia y la eficacia de los agentes antimicrobianos. En general, las personas nuevas en esta técnica tendrán dificultades porque el procedimiento quirúrgico es complejo.

Primero, inocular un asa llena de cultivo M SSA proveniente de una cepa congelada en un frasco de triplicado con sangre de oveja. Incubar el cultivo en una placa de agar soya durante la noche a 37 grados Celsius, asegurándose previamente de que no haya contaminación. Seleccionar una colonia de la placa y utilizarla para inocular cinco mililitros de caldo de soya triptasa en un tubo de 15 mililitros con tapa de rosca.

Incubar el inóculo a 37 grados Celsius durante la noche en un incubador con agitación. Ajustar a 200 RPM para preparar primero los catéteres. Cortar el tubo de polietileno en longitudes de 10 centímetros y esterilizar los catéteres en solución desinfectante cex durante 30 minutos.

A continuación, derrita un extremo de un tubo esterilizado presionando la punta con pinzas estériles calentadas para crear un catéter que pase desde la arteria carótida derecha hasta el ventrículo izquierdo y cause daño al endocardio cuando el corazón lata. Luego, anestesie la rata colocándola en una cámara que contiene una mezcla de isoflurano y oxígeno en proporción uno a uno hasta que haga efecto la anestesia. Confirme la anestesia verificando que los músculos estén relajados y que los reflejos plantares estén ausentes.

Mantenga un estado anestesiado durante la cirugía utilizando un cono nasal conectado a la mezcla de gases. Limpie el área quirúrgica con Betadine y etanol al 70 % empleando técnica estéril durante toda la cirugía. Coloque la rata en posición dorsal y realice una incisión verticalmente a través de la capa de piel del cuello por encima del esternón mediante disección romo.

Separar la fascia para exponer la arteria carótida derecha. La arteria carótida derecha se encuentra ligeramente a la derecha de la línea media, por encima de las clavículas. Extraer cuidadosamente la arteria fuera de la cavidad del cuello y colocar dos tramos de 10 centímetros de seda de sutura debajo de la arteria para ligarla en el extremo cefálico expuesto.

Luego coloque un clip en la arteria para prevenir el sangrado. Haga un pequeño orificio en la parte superior de la arteria utilizando un introductor de catéter con pinzas. Inserte el extremo no sellado del catéter a través del orificio en la arteria.

Retire la pinza y empuje el catéter hacia abajo, en dirección al corazón. El catéter debe avanzar entre cuatro y cinco centímetros dentro de la arteria y debe palpitar al ritmo del latido cardíaco de la rata, hasta que encuentre resistencia y quede correctamente insertado. Una vez que el catéter esté en su lugar, coloque una sutura suelta alrededor del extremo del catéter y asegure el catéter en posición.

Con sutura de seda, corte los extremos sobrantes de la sutura y del catéter, y luego coloque los extremos bajo la piel del cuello. Cierre la piel con grapas quirúrgicas. Coloque la rata en una jaula limpia y manténgala en un lugar cálido hasta que se recupere de la anestesia.

Proporcione alimento y agua y revise al ratón frecuentemente, tanto durante como después de la recuperación. La infección puede realizarse entre uno y siete días posteriores a la cirugía, pero el tiempo debe mantenerse constante dentro de los experimentos. Limpie la cola del ratón con etanol al 70 % e inyecte 0,5 mililitros de la cultura de MRSA en la célula deseada.

Introducir en la vena caudal. Utilizando una aguja de calibre 27 y media pulgada, aplicar presión en el sitio de inyección hasta que haya cesado cualquier sangrado antes de devolver la rata a su jaula. Después de sacrificar la rata, limpiar el tórax con etanol al 70 % y luego realizar una incisión en forma de V en el tórax por debajo del esternón.

Corte el cartílago de las costillas a cada lado del esternón. Para exponer el corazón, tire suavemente del corazón hacia arriba y corte el tejido cerca de la aorta, luego disecar hacia arriba para liberar el corazón. Coloque el corazón en una placa de Petri estéril forrada con gasa de cuatro por cuatro pulgadas, y luego haga un corte a través de la pared interna del ventrículo izquierdo y abra la cavidad izquierda.

Verifique la colocación correcta del catéter y luego retírelo. Examine y elimine las vegetaciones de la válvula con tijeras y pinzas. También retire los riñones y el bazo, y tras pesar y homogenizar los tejidos y las vegetaciones, realice diluciones seriadas en PBS para cultivo cuantitativo.

Se muestra aquí un catéter correctamente posicionado, como indica la flecha más a la izquierda. El catéter se extiende a través de la válvula aórtica y hacia el lado izquierdo de la cámara cardíaca, y se observan numerosas vegetaciones alrededor de las válvulas aórticas, como indican las flechas central y derecha. Esta tabla proporciona un ejemplo de la virulencia de una cepa ssus en el modelo de endocarditis en rata.

Todos los animales desafiados con inóculo de 10 a la quinta y 10 a la sexta UFC desarrollaron endocarditis con altas densidades de UFC en las vegetaciones cardíacas, así como en los riñones y el bazo. Una vez dominado, este procedimiento quirúrgico puede realizarse en menos de 10 minutos si se lleva a cabo correctamente.

Al realizar este procedimiento, es importante recordar mantener al animal en un estado evaluado durante la cirugía tras seguir este protocolo. No obstante, se pueden realizar métodos como el IVUS para responder preguntas adicionales, como la monitorización en tiempo real de la eficacia de agentes antimicrobianos y la expresión génica in vivo tras su desarrollo. Esta técnica abre el camino para que los investigadores en el campo de *Step orus* y ficción exploren su factor de virulencia patógena en la infección endovascular.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo establecer un modelo experimental de endocarditis en ratas. No olvide que trabajar con MRA puede ser extremadamente peligroso y que se deben tomar precauciones, como usar bata de laboratorio y guantes, durante la realización de este procedimiento.