Do-It-Yourself de dispositivos para la recuperación de las muestras criopreservadas de caída accidental en los tanques de almacenamiento criogénicos

El objetivo de este procedimiento es facilitar la recuperación de muestras en cajas criogénicas y viales criogénicos de tanques duales llenos de nitrógeno líquido, utilizando un dispositivo de fácil construcción. Esto se logra primero retirando uno o dos estantes del congelador para permitir espacio para maniobrar e insertar el dispositivo verticalmente en el congelador. El segundo paso consiste en raspar suavemente a lo largo del fondo del congelador con el dispositivo.

A continuación, jale el dispositivo verticalmente a lo largo de las paredes del tanque. Para extraer la caja congeladora del tanque, el paso final consiste en tomar la caja recuperada del fondo del tanque y reemplazar las bandejas congeladoras retiradas. La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes, como el vertido o el uso de barras llenas de nitrógeno líquido, es que proporciona una alternativa fácil, segura y rápida, que preserva la integridad de las muestras y puede realizarse por un solo operador. Para comenzar el ensamblaje del dispositivo criotolerante, utilice alicates para enderezar un lado de una brida fuerte de tres lados y así obtener una brida fuerte en forma de LHA.

Como se observa aquí, las dimensiones de la abrazadera resistente pueden seleccionarse según el diámetro del cuello del dispositivo. Se deben fabricar dos abrazaderas resistentes de este tipo para permitir que el dispositivo recupere cajas criogénicas de cinco y medio por cinco y medio pulgadas. Fije estas con una correa TST de abrazadera resistente utilizando un perno de corona, arandela y tuerca, y un tornillo para formar la base de la espátula criogénica.

El dispositivo ahora debería aparecer como se muestra aquí. Ahora, utilizando una placa ranurada, alinee las ranuras del soporte en T resistente con las ranuras en un extremo de la placa ranurada. Luego asegure ambos elementos juntos con tuercas y pernos Hillman.

Perfore agujeros para la fijación si la placa ranurada y las abrazaderas resistentes no tienen agujeros preperforados. Si se desea, se puede formar un mango doblando el otro extremo de la placa ranurada y envolviéndolo con espuma. Para agarrar mejor el dispositivo, asegúrese de retirar la espuma antes del cierre en el agua.

El dispositivo de recuperación casero tolerante al criogenizado también puede adaptarse para la recuperación de viales criogénicos. Esto implica sustituir la base plana por un colador de acero inoxidable modificado para extraer los viales del líquido. Para comenzar el ensamblaje, primero desenrosque las tuercas y pernos de la corona, y fije la correa resistente en forma de T para neumáticos a la placa ranurada.

Luego, antes de sujetar el colador de acero inoxidable a la placa ranurada, doble suavemente el cuello del colador con ayuda de unas pinzas para orientar la base en un ángulo que se asemeje a una cuchara. Si el colador utilizado tiene un borde, use las pinzas para doblar el borde hacia abajo. Esto facilitará la manipulación del dispositivo.

Alinee el orificio del mango del colador con los orificios de la placa ranurada y asegure el colador utilizando tuercas y pernos Hillman. Perfore orificios si el colador no tiene orificios previamente perforados. Para comenzar a retirar cajas de criogenia de un contenedor, asegúrese primero de ponerse guantes criogénicos.

Luego, retire una o dos bandejas del congelador para permitir espacio para maniobrar con el dispositivo. A continuación, utilice el dispositivo casero resistente al criogenio, colocado en posición vertical y equipado con la base fuerte tipo correa, para raspar suavemente el fondo del congelador y recoger la caja, que ha caído al fondo del tanque del congelador. A continuación, levante el dispositivo verticalmente a lo largo de las paredes del congelador para izar la caja del congelador fuera del tanque.

Tenga en cuenta que el dispositivo debe sujetarse verticalmente y extraerse directamente hacia arriba para evitar que la caja se deslice nuevamente dentro del recipiente. Para recuperar los viales criogénicos, utilice la espátula criogénica equipada con un colador para raspar suavemente el fondo del recipiente, de forma similar a la recuperación de cajas criogénicas; luego, levante el dispositivo en posición vertical y tome los viales acumulados en el colador. Un desafío importante en los estudios de expresión génica es que la calidad del ARN depende de las condiciones de almacenamiento tanto de las muestras de tejido congeladas como del ARN extraído.

Esta figura muestra el efecto del manejo de la muestra en la integridad del ARN total; el ARN total procedente de la misma fuente de tejido se sometió a diferentes manejos de muestra antes del experimento. El ARN total intacto muestra bandas claras de ARN ribosómico 28 s y 18 s, con la banda de ARN ribosómico 28 s aproximadamente dos veces más intensa que la banda de ARN ribosómico 18 s. Esto indica que el ARN está intacto. Las calles tres y cuatro muestran muestras con degradación significativa debido a descongelaciones parciales repetidas por recuperaciones a corto plazo del congelador, simulando así un almacenamiento a largo plazo con descongelaciones periódicas debidas a la necesidad de recuperar los viales caídos en las cajas.

Sin embargo, las muestras almacenadas en el servicio doer utilizando el dispositivo DIY y, por lo tanto, sin descongelación parcial, contienen ARN intacto en la banda dos. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo recuperar muestras del dvar lleno de nitrógeno líquido sin necesidad de verterlo.