Méthodes de dosage à Drosophila Comportement

L'objectif général de cette procédure est de démontrer des méthodes d'analyse des comportements sensoriels, moteurs et de coordination chez la drosophile. Cela est réalisé en évaluant d'abord la fonction motrice des larves à l'aide du test de ramper, puis la fonction motrice des adultes à l'aide du test de l'anneau, et enfin les capacités de coordination et sensorielles des adultes grâce au test de parade nuptiale. En définitive, ce panel de tests comportementaux permet de montrer comment des facteurs génétiques et externes, tels que des traitements médicamenteux, peuvent influencer l'activité et la coordination.

Intra sophala. Le principal avantage de ce test par rapport aux méthodes existantes, comme l'axe géo négatif, est que le test en anneau offre un débit plus élevé et une sensibilité accrue. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des maladies neurodégénératives, telles que la détection précoce des défauts locomoteurs.

La démonstration de ce test sera effectuée par le Dr Jamie Becknell, postdoctorant dans mon laboratoire. Le test de rampe des larves sert à mesurer l'effet de facteurs génétiques et environnementaux sur la motilité. Pour commencer, réalisez un croisement de 10 à 15 mâles et de 10 à 15 femelles vierges dans un flacon standard. Après 24 heures, les adultes en bonne santé auront pondu suffisamment d'œufs pour peupler le flacon, de sorte que la population ait un âge calibré à 24 heures.

Transférez les adultes dans un nouveau flacon et répétez le processus. Incubez maintenant le flacon jusqu’à l’observation de larves de troisième stade dans le milieu du flacon. Ajoutez 50 à 100 millilitres de saccharose à 20 % et laissez reposer pendant 20 minutes.

Les larves remonteront à la surface ; les recueillir à l’aide d’une pipette sérologique de 25 millilitres dont l’embout a été coupé, puis les transférer dans un panier en treillis. Rincer les larves deux fois dans le panier en treillis avec de l’eau déionisée. Elles sont désormais prêtes à être utilisées dans les expériences.

Pour traiter les larves avec un médicament, utilisez un pinceau pour transférer le nombre souhaité de larves dans un bécher de cinq millilitres contenant une solution de sucrose à 5 % et le médicament d'intérêt. Laissez-les se nourrir de la solution sucrée contenant le médicament pendant 15 minutes, puis reversez-les à travers le panier en maille, rincez-les, puis procédez à la mesure de l'effet du médicament sur la motilité. Utilisez un pinceau pour transférer une larve individuelle dans une boîte de Pétri de 15 centimètres contenant 2 % d'aros.

Placer sur une feuille de papier calque. Collecter maintenant les données. Compter simplement le nombre de lignes de la grille que la lave traverse en une minute.

Ensuite, utiliser le pinceau pour transférer la lave dans la cavité d'une boîte de dissection en verre contenant une solution diluée de pâte de levure sous un microscope stéréo pendant une période d'une minute, puis compter les contractions des Percys. Une contraction unique correspond à un mouvement complet allant de l'arrière vers l'avant. Répéter jusqu'à ce que le nombre souhaité de larves ait été compté.

Le protocole de l'anneau mesure la vitesse locomotrice d'animaux adultes. Collectez des mouches mâles adultes nouvellement émergées sous anesthésie légère et transférez-les dans un flacon standard contenant de la nourriture normale ou droguée. Placez environ 25 mouches par flacon. Maintenez les mouches à température ambiante pendant deux à trois jours afin d'assurer une récupération complète de l'anesthésie et l'accumulation de concentrations stables du médicament.

Ensuite, transférez environ 25 mouches sans anesthésie dans des flacons en polystyrène munis de bouchons moulés, puis assemblez les flacons en un ou plusieurs dispositifs en forme d'anneau. Laissez les mouches se reposer de 15 à 20 minutes tout en positionnant un appareil photo numérique pour prendre une vue latérale des flacons, préparez un chronomètre et réglez-le sur la durée souhaitée pour le test. Généralement, trois secondes pour effectuer le test.

Tenez l'appareil en forme d'anneau dans une main sans déranger les mouches et tenez le déclencheur de l'appareil photo dans l'autre main. Tapez trois fois sur l'appareil contre la paillasse pour faire tomber les mouches et déclenchez simultanément le minuteur de compte à rebours de l'appareil photo. Répétez l'essai une fois par minute jusqu'à ce que cinq ou six essais aient été réalisés.

Il est essentiel de ne pas réutiliser les tubes d'essai en polystyrène après avoir recueilli les premiers jeux de données. En effet, les nouveaux mouches placées dans des tubes utilisés ne grimperont pas autant que celles placées dans des tubes neufs. Pour recueillir les données, utilisez un visionneur d'images afin d'évaluer la hauteur moyenne atteinte par les différents groupes.

Cet essai nécessite des croisements génétiques préparés dans des flacons produisant une descendance abondante afin de collecter les mouches pour l'essai. À l’aube subjective de l’animal, videz les flacons quelques heures avant et collectez tous les adultes par intervalles de trois à quatre heures. Récoltez les mâles et femelles nouvellement émergés et sexuellement naïfs, placez les mâles individuellement dans des vials ou des tubes contenant du milieu nutritif, et regroupez les femelles par cinq à six individus.

Dans des enceintes similaires, un nombre égal de mâles et de femelles est requis pour le test. Après avoir isolé les mouches collectées pendant cinq jours, préparez-vous à les charger dans une roue d'accouplement et à réaliser le test. Ensuite, transférez soigneusement une femelle et un mâle dans la chambre d'une roue d'accouplement sous un microscope stéréo.

Observer le couple pendant 10 minutes ou jusqu'à ce qu'ils copulent avec succès dans cet intervalle. Noter le moment où chacun de plusieurs comportements est observé pour la première fois. Noter le moment où le mâle se tourne vers la femelle pour la première fois.

Quand le mâle touche pour la première fois la femelle avec sa patte, enregistrez le moment où le mâle étend et fait vibrer une aile ; enregistrez le moment où le mâle lèche pour la première fois les organes génitaux de la femelle ; enregistrez le moment où le mâle recourbe pour la première fois son abdomen sous son corps. Enregistrez le moment où le mâle tente pour la première fois de monter sur la femelle. Enfin, enregistrez la durée totale passée en comportement de parade jusqu'à l'accouplement.

Pour les animaux de type sauvage, cela se produit presque toujours dans un délai de cinq à dix minutes ; recueillez les données selon trois paramètres différents. Premièrement, la latence d'un comportement correspond au temps nécessaire avant que celui-ci ne soit observé pour la première fois. Deuxièmement, la fréquence d'un comportement indique s'il est ou non observé.

Et troisièmement, l'indice de parade est le temps passé en parade divisé par le temps total jusqu'à la copulation dans une expérience avec des animaux. Portant des mutations dans F-U-S-T-L-S associées à une sclérose latérale amyotrophique. Les mutants génétiques avec un centre d'insertion présentaient la moitié de la capacité de ramper des témoins de type sauvage à gauche, et une mutation faux-sens R 5 21 C réduisait la vitesse de ramper à seulement environ un centimètre par minute.

Le test de grimper effectué sur de jeunes mouches adultes de type sauvage a donné une hauteur moyenne grimpée comprise entre trois et cinq centimètres au cours d'une période de trois secondes. Dans cet essai, aucune désensibilisation n'a été observée lors de jusqu'à cinq essais consécutifs espacés d'une minute lors de l'exécution du test de grimper. Il est important de veiller à être aussi précis que possible en ce qui concerne le chronométrage.

Une fois maîtrisé, le test de surpopulation larvaire peut être réalisé en 30 à 40 minutes pour observer 10 essais pour un seul génotype, à condition qu'il soit effectué correctement. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez également bien comprendre comment observer et évaluer les comportements de parade chez la drosophile.