Essai simple pour la quantification de l'évitement social en Drosophila melanogaster

Le but de cette procédure est de quantifier la réponse des mouches au signal social émis par des individus stressés. Pour ce faire, il faut d’abord collecter les mouches, les mouches répondeuses et les mouches émettrices au plus tard deux jours avant l’expérience. La deuxième étape consiste à transférer les mouches émettrices et répondantes dans des flacons frais deux heures avant l’expérience et à les laisser s’habituer à la pièce à environnement contrôlé où le test sera effectué.

Ensuite, les mouches répondeuses sont placées dans les TMA et étant donné le choix entre un flacon dans lequel les mouches ont été préalablement stressées, contenant ainsi l’odorant de stress de la drosophile, et un flacon frais, la dernière étape consiste à compter le nombre de mouches répondeuses dans le flacon frais, dans le flacon DSO et dans l’élévateur pour quantifier leur réponse au DSO. En fin de compte, le labyrinthe en T est utilisé pour mesurer l’évitement par les mouches d’un signal de stress social, en particulier l’odorant de stress gillo. J’ai eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque j’étais post-doctorant à Caltech.

À cette époque, Greg Sue et son directeur de thèse David Anderson étudiaient la peur ou l’évitement social chez Phyla, mais il n’existait aucun test pour cela. Ils m’ont approché parce que je faisais beaucoup de tests de comportement dans le laboratoire de S brands et en effectuant des expériences de phototaxi et d’apprentissage olfactif, j’avais remarqué que les mouches étaient attirées par les flacons dans lesquels d’autres mouches avaient passé un certain temps sans être dérangées tout en évitant les flacons dans lesquels les mouches avaient été stressées à ce moment-là par un choc électrique. Évêque. La démonstration de cette méthode est essentielle car le processus expérimental du test d’évitement social nécessite une certaine pratique pour être rapide et efficace dans le transfert du bios sans perdre de mouches ou de DSL.

Le principal avantage de cette technique pour examiner les interactions sociales par rapport aux méthodes existantes telles que le suivi vidéo assisté par ordinateur, est qu’il s’agit d’un test facile à maîtriser et à mettre en œuvre, mais très puissant pour quantifier l’évitement social des individus stressés. Pour commencer l’expérience, coupez une feuille de polyéthylène poreuse pour couvrir une boîte de 12,7 centimètres sur 10,2 centimètres. Remplissez la boîte de glace pilée et couvrez-la avec la feuille pour compléter l’appareil d’anesthésie froide de la drosophile.

Effectuez l’expérience sur un banc recouvert d’un couvercle de banc blanc et d’un tableau blanc à l’avant pour assurer des conditions d’éclairage homogènes. Ensuite, préparez l’appareil de l’aspirateur à mouche vortex, le thermomètre et la minuterie. Un à deux jours avant l’expérience, le côlon anesthésie les mouches.

Transférez les mouches avec un entonnoir dans un tube de 50 millilitres et placez le tube dans un seau à glace isolé sous le niveau de la glace. Attendez cinq minutes que les mouches entrent dans un coma glacial. Transférez ensuite les mouches sur la feuille de polyéthylène poreuse à température ambiante et triez les mouches répondeuses au microscope stéréoscopique.

Séparez les mouches mâles de trois à sept jours des mouches femelles et maintenez ces mouches dans un groupe de 40 mouches émettrices de sexe mixte de Canton. À l’aide d’un aspirateur buccal, laissez les mouches s’échapper. Une nuit de récupération pour minimiser tout effet confondant de la collecte sur le comportement.

Ensuite, ouvrez le sac de flacons de test pour remplacer l’air vicié et sentant le plastique dans le sac par de l’air frais. Avant l’expérience, assurez-vous que la température de la salle d’essai est de 25 degrés Celsius, que la pièce est éclairée uniformément et que l’humidité est supérieure à 30 %Deux heures avant l’expérience, transférez les mouches répondeuses et émettrices dans des flacons d’aliments frais et permettez aux mouches de s’adapter à l’environnement sur la paillasse où l’expérience sera effectuée. Placez le labyrinthe de thé sur le tampon de martèlement et serrez le clip de vis pour que l’élévateur soit stable.

Ensuite, transférez les mouches répondantes dans un flacon de test frais et enclenchez le flacon contenant les mouches répondantes sur le dessus du labyrinthe de thé. Ensuite, inclinez l’appareil du labyrinthe de thé et tapotez-le sur le tapis de martèlement pour que les mouches à fruits tombent dans l’élévateur. Déplacez la partie supérieure de l’ascenseur vers le bas pour placer les mouches entre les sections supérieure et inférieure des TMA et assurez-vous que l’ascenseur est au-dessus du point de choix pour empêcher les mouches de s’échapper pendant que les mouches d’intervention s’adaptent au nouvel environnement.

Placez les mouches émettrices dans un flacon d’essai frais et garnissez-le d’un morceau de coton. Agitez le flacon sur un mini vortex de cette manière. Les mouches émettront du DSO, transféreront les mouches dans un flacon de nourriture et placeront rapidement le flacon rempli de DSO dans l’un des deux côtés de l’équipe.

A alterner le côté de placement du flacon rempli de DSO. À chaque nouvelle série, placez un flacon d’essai frais de l’autre côté de l’équipe A, puis abaissez complètement l’élévateur pour que les mouches à fruits puissent choisir entre le flacon d’essai frais et le flacon rempli de DSO. Démarrez immédiatement la minuterie.

Au bout d’une minute, déplacez l’élévateur vers le haut pour séparer les mouches dans le flacon frais et le flacon DSO des mouches coincées dans l’élévateur. Comptez le nombre de mouches dans chaque flacon et dans l’élévateur. Répétez cette opération.

Pour chaque génotype et/ou groupe de condition, la taille des mouches répondeuses n’influence pas leur évitement du DSO. Après avoir réalisé l’expérience sur une plage de 10 à 80 mouches, un test T n’a montré aucune signification statistique parmi les indices de performance ou IP des mouches répondeuses. Le nombre de mouches émettrices a un impact sur l’évitement du DSO par les mouches, comme le montre ce graphique, qui représente différents essais.

En utilisant 10 à 160 mouches émettrices chacune. Un évitement substantiel a tout de même été détecté avec seulement 10 mouches stressées. Le choix, le moment et le patrimoine génétique des mouches des fruits affectent la réponse au DSO, comme le montre ce graphique, qui illustre une réponse des souches de Canton et d’Elwood.

Les deux génotypes présentent un évitement plus fort du DSO que l’Oregon et certaines souches de markin après son développement. Cette technique a permis aux chercheurs dans le domaine des neurosciences d’identifier le circuit neurologique sous-jacent à la perception et à l’évitement du CO2, l’un des composants du DSO. Il a également été utilisé pour étudier le rôle des gènes candidats à l’autisme dans l’impact sur le comportement social.

Dans Joseph Ano Gaster. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins de cinq minutes par répétition. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer un test d’évitement social, de la préparation des mouches émettrices et répondeuses avant de les tester à la génération des biographies de terrain DSL et à la manipulation des coéquipiers pour fournir aux répondeurs un choix binaire.