19 בנובמבר 2011
טכניקת הנתיחה ממחישה enucleation של עין העכבר לקיבוע רקמות כדי לבצע phenotyping במסכי תפוקה גבוהה.
סרטון זה ידגים את עין העכבר ואת תהליך הניקלאציה (nucleation), כלומר הוצאת גלגל העין ממסלול העין. גלגל העין מוגבל על ידי שולי העפעף התחתון. כאן נמצאת הזווית הפנימית או הנזית (medial or nasal canthus).
מאחור נמצאת הזווית הרקותית או הלטרלית. מעל נמצא שפת העפעף העליונה. כאן מוצג דגימה כירורגית.
המחט מצביעה על הקרנייה השקופה. ניתן לראות חלק קטן מהעדשה בולט מעבר לקשתית. הקשתית מופיעה כאן בחום, ומכסה את העדשה.
נקודת האסון הכירורגית החשובה ביותר היא הקו הלבן הזה, או הלימבוס (limbus), שבעקבותיו נבצע פצע דקירה ממש מאחוריו. החצי האחורי של גלגל העין נמצא מאחורי הלימבוס, וכאן אנו מצביעים על נקודת השבחה של שריר. ניתן לראות את השריר נשען על גלגל העין כאן, ולאחר מכן את רקמת החיבור הממלאת את מחלול העין וכוללת את בלוטת אריאן (Arian gland).
ולבסוף, זהו הפס הלבן והארוך של העצב האופטי שהתקבל מדיסקציה קהה. באמצעות פינצטת חבישה מעוקלת, שהותאמה אישית עם קצה חד, התחילו בהרחקה של העפעפיים. פעולה זו נוטה להוציא את העין ולהרחיקה החוצה.
השתמשו בפינצטה בזהירות כדי להיכנס למסלול העין ומאחורי גלגל העין, דחסו אותה בעדינות מאחורי גלגל העין ללא לחיצה עליו ומשכו קדימה. אתם אמורים להצליח לתפוס את רקמת החיבור ולא את גלגל העין. אם תסובבו את גלגל העין הצידה, תוכלו לראות את רקמת המסלול יחד עם העצב האופטי הלבן.
זוהי נתיחה שנייה רק כדי להראות שוב שניתן להיכנס דרך הזווית (canthus), לדחוף את הפינצטה מאחורי גלגל העין, לתפוס את רקמת החיבור ולמשוך אותה קדימה מבלי להפעיל לחץ על גלגל העין עצמוו. שוב, ניתן לראות את רקמת החיבור בפס הלבן והארוך של העצב האופטי. כדי ליצור פצע דקירה, אחזו בגלגל העין באמצעות נקודת חיבור של שריר והחדירו מחט מאחורי הלימבוס (limbus), ממש לצד המקום שבו אתם מחזיקים את העין כדי לייצב אותה.
פעולה זו תאפשר למקבע לחדור לעין. אם תבצע את הדקירה רחוק מהנקודה שבה אתה מחזיק את העין, גלגל העין יהיה לא יציב מאוד, ויהיה קשה ליצור את הפצע באורך הרצוי מבלי לדחוס את העין או להפעיל לחץ מיותר. ניתן גם לתפוס את כל הרקמה החיבורית שנמצאת מיד מאחורי גלגל העין עצמו.
חלק ממקבעים אינם דורשים פצע דקירה. באופן כללי, אנו מניחים את העין בבקבוק סינצילציה של 5 cc עם לפחות 3 cc של מקבע כדי להבטיח שהעין שקועה. עבור בעלי חיים שעברו קיבוע בפרפוזיה, נדרשת נתיחה חדה.
אנו משתמשים בפינצטה קליברי (calibri) מעוקלת ובמספרי וסקוט (wescott) מעוקלים. תפסו את העפעף התחתון באמצעות פינצטת הקליברי. הכניסו את המספריים כנגד עצם המ Orbita, והתחילו בחיתוך הרקמה החיבורית.
אנו משתמשים בעקמומיות הרחק מגלגל העין ונמנעים משינוי הגודל. כל חלק של העין יעבוד לאורך שולי העפעף התחתון, מקוות אחת לשנייה. בנקודה מסוימת, רוב רקמת החיבור תוסר, ותוכל להחליק את המספריים מאחורי גלגל העין ולמשוך אותו הרחק.
הנה דוגמה נוספת, הכנסת המספריים למסלול העין, אך כנגד עצם המסלול ולא כנגד גלגל העין, תוך גזירה של הרקמה החיבורית. פעולה זו תתחיל לשחרר את גלגל העין, שנמצא במצב של כדורסל בתוך סל. השתמשו בפינצטה כדי להסיט את העפעפיים והבצעו חתכים קצרים ועדינים מסביב לגלגל העין.
כעת נתפוס את רקמת החיבור או את נקודת חיבור השריר באמצעות ה-Collibra ונסיים לחתוך את גלגל העין מרקמת החיבור של מחלול העין. לאחר שגלגלי העין מקובעים כראוי, ובמידה ויש להוביל אותם, נניח מעט para film סביב מבחנת הקיבוע.
האריזה חייבת להיות בהתאם לתקנות האוניברסיטה והממשלה. בדרך כלל אנו מניחים את אלו בתוך מכל עם מעט צמר גפן כדי לספוג נוזלים; מכל זה חייב להיות אטום היטב. מכל השילוח מונח לאחר מכן בתוך שקית פצפצות.
יש להניח זאת בתוך מארז משלוח מעבדתי לנוזלים, יחד עם כל התיעוד הרלוונטי.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סרטון זה מדגים את טכניקת העקירה (enucleation) של עין העכבר, שהיא קריטית עבור קיבוע רקמות במסכי פנוטיפיקה בעת שגובה תפוקה גבוה. הפרוצדורה כוללת את הוצאת גלגל העין מהמ Orbita, תוך הדגשת נקודות ציון אנטומיות לצורך בהירות.
פנוטיפינג מרחוק בthroughput גבוה של עיני עכברים מאפשר ניצול מבוזר של משאבים גנטיים ומאיץ את הגילוי של מתאמי גנוטיפ-פנוטיפ במודלים של מחלות עיניות. פרוטוקולים סטנדרטיים של הוצאת עיניים (enucleation) והעברת רקמות מפחיתים חסמים גיאוגרפיים ותפעוליים, ובכך תומכים במחקר פרה-קליני בר-הרחבה במספר אתרים. גישה זו משפרת את הגישה לכלל הפורטפוליו עבור קווים טרנסגניים נדירים או מפוזרים גיאוגרפית לצורך תיקוף יעדים בשלבים מוקדמים וסריקה פנוטיפית.
פרוטוקול זה להוצאה מרחוק של העין (enucleation) והעברת רקמות משתלב ברצף הגילוי המוקדם והשלב הפרה-קליני, ומגשר בין יצירת מודלים גנטיים לבין פנוטיפ וניתוח מרכזים.