הכנה ואפיון של פרט ורב-סמים נטענים בפח פיזי Micelles פולימרית

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לשרטט תהליך שלב אחר שלב של הכנה ואפיון של תאי התרופה לפני הערכתם במצבי מחלה מעניינים. זה מושג על ידי הכנת התאים שלי בשיטת יציקת ממס כדי ליצור תאי My הניתנים לשחזור למחקר. כשלב שני, מעריכים את יציבות וגודל העמסת התאים שלי, מה שקובע את יכולתם של התאים שלי לטעון ולשמור על ריכוזים רלוונטיים מבחינה קלינית.

לאחר מכן, קצב שחרור התרופה מהתאים שלי נקבע על מנת להבטיח שלתאים שלי יש מאפייני שחרור מבחנה מתאימים לפני הערכת יציבות in vivo. התוצאות מראות כי התאים היציבים שלי שנוצרו באופן שחזורי יכולים לספק פלטפורמה להמשך מתן תרופות במצבי מחלה שונים בהתבסס על טכניקות ההערכה המוצגות כאן. היתרון העיקרי של טכניקה זו או שיטות קיימות כמו העמסת שיווי משקל או שיטות דיאליזה, הוא שניתן להכין את המיוזינים הרבה יותר מהר עם העמסת תרופות וגודל הניתנים לשחזור.

ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על טיפול או אבחון של מצבי מחלה שונים מכיוון שתרופות בקנה מידה ננומטרי מציעות הזדמנויות מעבר לצורות קונבנציונליות, בדרך כלל אנשים שרק מתחילים עשויים להיאבק בטכניקות אלה למרות שהן פשוטות מכיוון שעדיין אתה יכול לעשות את מחקרי השחרור, אתה לא באמת יכול להעריך את אפקט ההתפרצות. מדגימים את ההליך הזה שאמאן דיוק, הסטודנט שלי לתואר שני, ודיפה השותפה שלי שוקלים תחילה מיליגרם אחד של DTX, מיליגרם אחד של EVR ו-15 מיליגרם של Peg 4, 000 block PLA 2200 עבור התרופה הכפולה התאים שלי או DDM. לאחר השקילה, ממיסים את התרופות והפולימר ב -0.5 מיליליטר אצטו ניטריל, ואז מעבירים את התמיסה לבקבוק תחתון עגול של חמישה מיליליטר יוצרים סרט פולימרי דק המופץ על ידי אידוי תמיסת האצטו של פולימר התרופה בלחץ מופחת באמצעות מאייד סיבובי.

לאחר מכן, יש להרטיב את סרט הפולימר של התרופה עם 0.5 מיליליטר מים נטולי יונים שחוממו מראש ב-50 מעלות צלזיוס ולנער בעדינות את הבקבוק באמבט מים של 50 מעלות צלזיוס כדי ליצור את תאי העכברים. הוסף את התמיסה לצינור צנטריפוגה וסובב ב 7, 200 פעמים G למשך שלוש דקות. שרטטו את התמיסה בעזרת מחט וסננו את תמיסת המיקלה המתקבלת לתוך צינור צנטריפוגה חדש של 1.5 מיליליטר באמצעות מסנן ניילון של 0.2 מיקרון כדי להסיר כל תרופה או מזהמים לא פתורים בשלב זה, בצע ניתוח HPLC בשלב הפוך עם שמונה עמודות C מאוזנות ב-40 מעלות צלזיוס במצב סוקרטי עם שלב נייד של ניסוי אצטיל I ומים לדלל את התאים הטריים שהוכנו בניסוי עיניים ב יחס של 1 ל-100 לפני ניתוח על ידי HPLC בשלב הפוך כדי לקבוע את העמסת התרופות הראשונית.

לאחר אחסון התאים שלי בטמפרטורת החדר במשך 48 שעות, הכינו דגימות מדוללות טריות להערכה מחדש על ידי HPLC בשלב הפוך וקבעו את יציבות התרופה בתאים שלי במשך 48 שעות. עקוב אחר שיאי ה-DTX וה-DVR ב-227 ו-279 ננומטר עם זמני שמירה של 1.7 ו-5.7 דקות בהתאמה. הצג את הנתונים כסטיית התקן הממוצעת פלוס מינוס של העמסת התרופות.

לאחר מכן, יש לדלל את התאים הטריים שלי ואת המים נטולי היונים ביחס של 1 ל-20 לריכוז פולימרי סופי של 1.5 מיליגרם למיליליטר. העבירו את התמיסה לווטרינר למדידת פיזור אור דינמי. מדוד את עוצמת לייזר ניאון הליום ב-173 מעלות כדי לקבוע את הפיזור.

הצג את הנתונים כגודל הממוצע Z הממוצע פלוס או מינוס סטיית תקן יחד עם מדד פיזור הפולי או PDI של ההתפלגות. לאחר הכנת DDM כפי שתואר קודם לכן, טען 2.5 מיליליטר מהתאים שלי לקלטת דיאליזה של שלושה מיליליטר עם חתך משקל מולקולרי של 7,000 גרם למול. הנח את הקסטה ב -2.5 ליטר של מאגר פוספט pH 7.4 מילימולרי של 10 מילימולרי במהלך המרווחים הבאים.

משוך 150 מיקרוליטר מהתמיסה והחלף ב-150 מיקרוליטר של חיץ טרי. החלף את המאגר כל שלוש שעות כדי להבטיח תנאי סנכרון. נתח את הדגימות באמצעות HPLC פאזה הפוכה כדי לקבוע את עקומת ריכוז התרופה.

התאם את נתוני שחרור התרופה המבוססים על מודל דיפוזיה פשוט עם אסוציאציה מעריכית חד פאזית באמצעות תוכנה סטטיסטית D-T-X-E-V-R וה-DDM הראה יציבות דומה בבלוק PEG 2000 PLA 1800 או PEG 2000 בלוק PLA 2200 במשך 48 שעות. כל התאים שלי שמרו על 97% או יותר מהטעינה הראשונית ב-48 שעות בטמפרטורת החדר. בהתבסס על תוצאות פיזור האור הדינמי, כל התאים שלי הראו התפלגות חד-מודאלית עם ערכי PDI של פחות מ-0.2.

בהתבסס על הנתונים שחרור DTX מ-mycells בודדים ו-DDM היה כ-60% במשך 48 שעות. שחרור EVR מהתאים הבודדים שלי ו-DDM היה 60% ו-50% בהתאמה. הזמן הדרוש לשחרור תרופות של 50% מהתאים הבודדים שלי ו-DDM ונתוני ההתאמה הטובים מוצגים כאן.

הטוב של עקומה המתאימה לכל התאים שלי מלבד EVR בודד, התאים שלי הוא מעל 0.950, מה שאומר שההנחה של שחרור מסדר ראשון היא קירוב טוב להסביר שחרור תרופות מהתאים הבודדים שלי ו-DDM לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקות אלה באופן שגרתי על ספריית תרופות ופולימרים כמו התאים שלי תוך שעות עד שבוע. בזמן ההשתתפות בהליך זה, חשוב לזכור לאפיין לחלוטין את התאים שלי לפני הגישה לתרבית התאים או למודלים של בעלי החיים בעקבות הליכים אלה. ניתן גם להעריך או לאפיין מערכות אספקה אחרות כמו מערכת אספקה ליפוזומלית על מנת לענות על השאלה לגבי תפקידה של מערכת מתן התרופות ביעילות הטיפול.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להכין ולאפיין את העמסת התרופות בתאים שלי לפני הערכת אותם במחלה. מצב של עניין.