Semiautomated האורך מבוסס-טומוגרפיה Microcomputed כמותיים ניתוח מבנה של מודל הקשורות אוסטיאופורוזיס שבר בחוליות עכברוש עירום

המטרה הכוללת של מודל כירורגי זה ושיטת ניתוח תמונה היא להתבונן בהשפעת הטיפול שלך על מודל שבר דחיסה חולייתי פרה-קליני הקשור לאוסטאופורוזיס. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום זה של רפואה רגנרטיבית גליאלית, כגון מה יכול להיות טיפול יעיל לשברי דחיסת חוליות הקשורים לאוסטאופורוזיס, וכיצד טיפול כזה יסייע בהתחדשות העצם? היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מערבת חולדות עירומות כך שניתן לבדוק טיפולים חדשים in vivo ללא חשש מדחייה חיסונית.

יתר על כן, התחדשות העצם עומדת בבסיס שיטה זו המוצגת כאן היא אוטומטית למחצה ולכן היא מדויקת יותר ופחות תלויה במשתמש ממה שפורסם בעבר. מי שתדגים את ההליך תהיה ד"ר וופא טווקולי, מדענית חוקרת מהמעבדה שלנו. ראשית יש לגרום להרדמה בחולדה אוסטאופורוטית באמצעות 5% איזופלורן ב-100% חמצן ולאחר מכן להעביר לקונוס אף ב-2% עד 3% איזופלורן לצורך תחזוקה.

לגלח את אזור הבטן באמצעות מכונת גילוח חשמלית. ספוגית עם חומר חיטוי על בסיס יוד ב-0.5% כלורהקסידין גלוקונאט ואחריו 70% אתנול. יש להשתמש במשחה וטרינרית על העיניים כדי למנוע יובש בזמן הרדמה.

החל גירוי צביטה בבוהן כדי להבטיח מישור הרדמה הולם. אם לא צוינה תגובה, התחל את ההליך. הניחו את החולדה המורדמת בשכיבה גבית על כרית חימום המוגדרת ל-37 מעלות צלזיוס ומתחו את הגפיים באמצעות מערכת נסיגה מגנטית של קיבוע.

יש להזריק לחולדה קרפרופן תת עורי לפני תחילת ההליך הכירורגי. לאחר ביצוע חתך של חמישה עד שמונה סנטימטרים בעור החל מסנטימטר אחד מתחת לתהליך ה- xiphoid ודרך קו האמצע, השתמש במספריים כירורגיים כדי לבצע חתך של האפונורוזיס דרך הלינאה אלבה כדי לגשת לחלל הבטן. חשוף את חלל הבטן באמצעות מחזירים.

הסיט את המעיים מימין לחולדה כדי לחשוף את אבי העורקים הבטני ואת הכליה השמאלית. כדי למנוע התייבשות, השתמש בגזה ספוגה סטרילית כדי לעטוף את האיברים הפנימיים. השתמש במחזירים נוספים לפי הצורך כדי לחשוף את אבי העורקים.

משש את עמוד השדרה המותני ואז המשך לחשוף אותו. השתמש בתרמו-קוטרי כדי לחשוף את ההיבט הקדמי של גופי החוליות המותניים L ארבע עד חמש ולבודד אותם מרקמת החיבור והשרירים שמסביב. השתמש במקלון צמר גפן כדי להסיר דם ושאריות רקמה מארבע חוליות L.

לאחר מכן השתמש במקדח סטרילי בקוטר שני סנטימטרים כדי לקדוח פגם בעצם בעומק חמישה מילימטרים במרכז ההיבט הקדמי החשוף של גוף החוליה. הפעל לחץ מינימלי כדי לקדוח רק דרך קליפת הגחון והעצם הטרבקולרית שמתחתיה. הימנע מקידוח דרך קליפת המוח הגבית.

לאחר מכן קדחו את חמש החוליות L באותו אופן כדי ליצור שני פגמים לכל חולדה. בסיום הקידוח, החזירו את המעיים לחלל הבטן והסירו את המחזירים. לאחר מכן השתמש בתפר כירורגי נספג סינטטי ויקריל בדפוס רציף כדי לתפור את האפונורוזיס.

סגור את העור באמצעות תפר ניילון מונופילמנט 4-0 שאינו נספג בתבנית קטועה פשוטה. לאחר מכן מרחו 100 מיקרוליטר של דבק עור מקומי על גבי ובין תפרי העור כדי להבטיח סגירה מלאה של העור. לאחר הזרקת תמיסת רינגר חלב בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למניעת היפותרמיה והתייבשות ובופרנורפין לשיכוך כאבים לאחר הניתוח, אפשר לבעל החיים להתאושש מההרדמה על כרית החימום.

ביום שלאחר ההליך הכירורגי יש לגרום להרדמה עם איזופלורן כמו קודם. סרוק את החולדה באמצעות סורק מיקרו-CT in vivo. לאחר סריקה והתאוששות מההרדמה, החזירו את החולדה לכלוב הביתי.

כדי להפריד את נתוני החוליות לניתוח לחץ על תוכנית הערכת מיקרו-CT ובחר את הדגימה מהתפריט. לאחר מכן השתמש בעכבר כדי לעצב חוליות בודדות על פרוסה. השתמש בסרגל Z כדי לעבור לפרוסה הבאה ולעצב את החוליות הבודדות באותו אופן.

שמור את החוליה המעוצבת כקובץ נפרד על ידי לחיצה על קובץ, שמור GOBJ כל כמה פרוסות. לאחר מכן לאחר הגדרת חוליית הייחוס, ייבא אותה לסביבת מיקרו-CT. החל את ה-VOI שהוגדר עבור חוליית הייחוס על חוליית היעד הרשומה על ידי לחיצה על תוכנית הערכה של מיקרו-CT, קובץ, טען GOBJ ובחירת ה-GOBJ שנוצר בעבר.

לבסוף שלח את ה-VOI להערכה באמצעות תוכנית הערכה של מיקרו-CT. תמונה תלת מימדית קדמית זו מציגה תמונה מייצגת של פגם בחוליות יום אחד לאחר יצירת הפגם. היווצרות עצם בחלל מסומנת באדום.

זוהי תמונה דו-ממדית סגיטלית של אותו אזור, ולבסוף תמונה דו-ממדית צירית. כפי שניתן לראות כאן היווצרות עצם מתרחשת לאורך זמן ומתגלה בהדמיה אורכית. צפיפות נפח העצם והצפיפות הנראית לעין חושבו והושוו באמצעות ANOVA דו-כיווני למדידות חוזרות ונשנות עם תיקון בונפרוני להשוואות מרובות.

כפי שניתן לראות כאן, צפיפות נפח העצם והצפיפות הנראית לעין גדלים משמעותית משבועיים לאחר יצירת הפגם בחוליות. בעקבות הליך זה ניתן לבצע שיטות אחרות כמו היסטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה על מנת לענות על שאלות נוספות כמו אילו תאים קיימים ואילו חלבונים באים לידי ביטוי בפגם. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליצור פגמים מרובים בחולדות עירומות ולנתח את התחדשות העצם לאורך זמן בפגמים אלה.